與IdeS不同，度拉糖肽由兩個胰高xue糖素樣肽-1 （GLP-1） 分子組成，它們通過柔性 GS 接頭連接到人 IgG4 的 Fc 區(qū)域。為了分別研究肽和 Fc 區(qū)域，從而鑒定結(jié)構(gòu)域特異性 PTM，用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下凍干消化度拉糖肽 1 小時。為了降低樣品復(fù)雜性，使用內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖，并用DTT還原鏈間二硫鍵。反相LC-MS對樣品的分析表明，使用GlySERIAS進(jìn)行連接子消化后，肽從Fc區(qū)域完全去除。連接子中的大量甘氨酸殘基為GlySERIAS提供了許多不同的潛在消化位點(diǎn)，這就是為什么Fc/2和GLP-1肽都被檢測為幾種變體，其中不同數(shù)量的甘氨酸和絲氨酸殘基仍然連接。此外，還鑒定了GLP-1肽的氧化。盡管GlySERIAS同時在多個位點(diǎn)進(jìn)行消化，但一式三份的酶解在獲得的不同F(xiàn)c/2變體的相對量中顯示出可重復(fù)的結(jié)果。IgMBRAZOR 是IgM 特異性蛋白酶。山西FabALACTICAIdeS蛋白酶抗體酶切

IgA 消化酶的 IgASAP 家族特異性消化血清和分泌型人 IgA 以生成 Fab 和 Fc 片段。IgASAP Sub1 特異性消化人 IgA1，而 IgASAP Sub1+2 同時消化人 IgA1 和 IgA2m1。 Sub1+2 特異性消化鉸鏈上方的 IgA1 和 IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。為了獲得純和完整的Fab片段，使用Genovis的GingisKHAN Fab Kit進(jìn)行人IgG1的消化和抗體片段的后續(xù)純化。通過與 GingisKHAN 孵育，然后在 CaptureSelect? 人 CH1 離心柱上親和純化，在曲妥珠單抗上證明了完整的片段生成。樣品的酶和Fc部分存在于色譜柱的流通中，F(xiàn)ab很容易通過降低pH洗脫。使用該試劑盒，可以制備 0.5 mg 至 2 mg 人 IgG1 的 Fab 片段。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。 安徽FabULOUSIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段，您需要另一種填料。

Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶 可用于 IgG 的所有人類亞類以及人源化和嵌合 IgG。該酶對其他物種的 IgG 也有活性，包括來自大鼠、猴子、兔子和綿羊的某些類別的 IgG。因此，F(xiàn)abRICATOR的高特異性在某些情況下會使其對鉸鏈區(qū)域的突變敏感，并損害酶活性。來自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成，與 FabRICATOR 相比，F(xiàn)abRICATOR Z 在消化這些 IgG 方面具有更高的效率。然而，小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列，并且不被 FabRICATOR Z 消化。對于這種抗體種類，F(xiàn)abULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。

與IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶，可在鉸鏈上方的一個特定位點(diǎn)消化人IgA1，產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小時內(nèi)完成，并且由于酶的特異性，如果孵育時間延長，則不存在過度消化的風(fēng)險。該酶在pH值6.5至8.0下具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可發(fā)揮活性?；钚允窃?7°C下，但也可以在室溫下使用增加孵育時間進(jìn)行消化。IgASAPSub1是從口腔鏈球菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為148kDa。IgASAPSub1凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個單位的小瓶中，用于消化1mgIgA1。這正是您使用FabRICATOR（IdeS蛋白酶）可以得到的。

蛋白酶用于生成肽，用于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)。這些應(yīng)用包括蛋白質(zhì)組學(xué)和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導(dǎo)的偽影，傳統(tǒng)的蛋白酶并不總是理想的，因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶，可將蛋白質(zhì) C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比，所得肽更長，并可能導(dǎo)致序列覆蓋率增加。質(zhì)譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù)集和避免復(fù)雜的數(shù)據(jù)解釋至關(guān)重要。作為模型底物，使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個精氨酸和一個賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質(zhì)譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性，即使在長時間孵育過夜后，酶與底物的比例也很高（1：5）。然而，ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性，但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1：20 和過夜孵育下，證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下，GingisREX未檢測到這種情況。數(shù)據(jù)證實(shí)了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性，并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。Genovis發(fā)現(xiàn)更多的緩沖液與FabRICATOR活性兼容。河北FabDELLOIdeS蛋白酶

使用胰島素氧化β鏈來比較GingisREX和ArgC的酶特異性。山西FabALACTICAIdeS蛋白酶抗體酶切

Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR（IdeS），為客戶提供了許多選擇，以滿足他們的需求。 凍干形式用于高度靈活的方法開發(fā)的目的，并隨時準(zhǔn)備使用，只需重組和添加到IgG樣本。 凍干酶的靈活性也意味著它可以應(yīng)用于更高的通量和自動化的工作流程。 Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶，在隨時可用的旋轉(zhuǎn)柱中，這可以極大限度地減少在樣品中殘留的酶，這可能是有利的。 對于更多的制備應(yīng)用，我們提供FabRICATOR Fab2試劑盒，這是IgG片段生成和純化的強(qiáng)大工具。 這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱，用于亞基的親和純化。 由于FabRICATOR在非還原條件下是活性的，F(xiàn)(ab’)2片段保留其鏈間和鏈內(nèi)二硫鍵，如果片段想用于結(jié)合研究，這一點(diǎn)尤為重要，因?yàn)榻Y(jié)合效率和免疫反應(yīng)性將被保留。山西FabALACTICAIdeS蛋白酶抗體酶切