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具有保密性的材料除外)。2、目的蛋白相應(yīng)一抗:請您提供質(zhì)量保證的一抗(或委托我公司準(zhǔn)備)??贵w的使用量通過預(yù)實驗后進行確認,原則上不回收使用一抗。3、陽性對照樣品(盡量提供)。4、相關(guān)文獻(可選)。注:若要檢測磷酸化蛋白,請在2-3個月內(nèi)進行,因為長時間保存的樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測不到磷酸化條帶。五、提交給客戶結(jié)果1、預(yù)實驗顯色結(jié)果(TIFF格式、JPEG格式或PNG格式),預(yù)實驗采取3個一抗稀釋度,選取部分實驗樣本。2、正式實驗顯色結(jié)果(TIFF格式、JPEG格式或PNG格式)。3、完整實驗報告。六、服務(wù)項目說明1、提供的蛋白量與待檢測的目的蛋白數(shù)量有關(guān),蛋白數(shù)量增加相應(yīng)的樣品量也要增加。2、每張膜樣品數(shù)量為1-8個,不足8個以8個收取。9-16個樣品為2張膜,17-24個樣品為3張膜;以此類推。舉例:7個樣品,1個目的蛋白,算1張膜;有9個樣品,1個目的蛋白,算2張膜;7個樣品,2個目的蛋白,算2張膜,有9個樣品,2個目的蛋白,算4張膜。注:以上為一般算法。如果客戶樣品數(shù)量需要按照組別等來進行上樣時,需要重新確定每張膜的上樣量及膜的張數(shù)。3、選擇部分樣品進行預(yù)實驗,參考目的蛋白一抗說明書進行3個稀釋度的預(yù)實驗。EdU細胞增殖檢測試劑盒哪家便宜?上海東寰告訴您。北京品質(zhì)好的EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢
EdU上的乙炔基能與生物素標(biāo)記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過一價銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng),形成穩(wěn)定的三唑環(huán),該反應(yīng)非常迅速,被稱作點擊反應(yīng)(Clickreaction),其反應(yīng)原理參見圖1。通過點擊反應(yīng),新合成的DNA會被相應(yīng)的生物素探針?biāo)鶚?biāo)記,從而可以使用適當(dāng)?shù)臋z測設(shè)備檢測到增殖的細胞。EdU檢測法中的點擊反應(yīng)(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標(biāo)記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細胞DNA中的EdU,在銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng),形成穩(wěn)定的三唑環(huán),終使細胞DNA標(biāo)記上生物素等探針。江西哪家公司提供EdU細胞增殖檢測試劑盒說明書EdU細胞增殖檢測試劑盒的原理是什么?上海東寰告訴您。
Jurkat細胞只用EdU標(biāo)記(左列),或在標(biāo)記EdU0min用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)處理(右列),2小時后染色,然后通過流式細胞儀進行檢測。從流式結(jié)果圖中可以看出,EdU標(biāo)記的細胞有較高比例的綠色熒光陽性細胞,呈現(xiàn)綠色熒光陰性(弱染色)和陽性(強染色)的兩個峰,分別對應(yīng)于未增殖細胞和增殖細胞。經(jīng)過Hydroxyurea處理的細胞,綠色熒光陽性的細胞幾乎完全消失,剩下一個綠色熒光陰性的峰。Hela細胞只用EdU標(biāo)記(左列),或在標(biāo)記EdU0min用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)處理(右列),2小時后染色(步驟染Hoechst,方便觀察增殖細胞比例),然后通過熒光顯微鏡進行檢測。鏡下可見,*EdU標(biāo)記的細胞有一部分染上綠色熒光的增殖細胞,未增殖細胞的細胞核呈藍色單染。
這幾種方法盡管都不是檢測DNA合成的,但被用于替代[3H]thymidine摻入法。CFDASE法(C0051、C1031)基于細胞熒光示蹤的原理能檢測到單個的增殖細胞,但由于每增殖一次熒光減弱一半,在熒光顯微鏡下較難區(qū)分熒光減弱一半的細胞,檢測靈敏度不是很高,通常*適用于流式細胞儀檢測。在進行科學(xué)研究時,上述這些基于細胞活性或CFDASE的方法可以作為EdU法的補充性檢測方法。EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine),中文名為5-乙炔基-2-脫氧尿苷,是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷,thymidine)類似物,EdU可以在DNA合成過程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。上海東寰告訴您EdU細胞增殖檢測試劑盒哪家好?
EdU-488細胞增殖檢測試劑盒(MeilunEdUCellProliferationKitwithAlexaFluor488),是一種利用核苷滲入法對細胞增殖情況進行快速、簡單、高靈敏檢測的試劑盒。其原理為:試劑盒中的EdU(5-ethynyl-2′-deoxyuridine)是一種胸苷(T)類似物,EdU可以在在細胞周期的S期中替代胸苷摻入到新合成的DNA中;另一方面,EdU上的乙炔基能與疊氮化物(如熒光探針AlexaFluor488Azide)通過Cu+的催化發(fā)生共價反應(yīng),形成穩(wěn)定的三唑環(huán),該反應(yīng)非常迅速,被稱作點擊反應(yīng)(Clickreaction)(圖1)。通過點擊反應(yīng),新合成的DNA會被綠色熒光標(biāo)記,然后通過檢測熒光信號實現(xiàn)細胞增殖的檢測。上海東寰與您分享EdU細胞增殖檢測試劑盒發(fā)揮的重要作用。河南咨詢EdU細胞增殖檢測試劑盒原理
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EdU(5-溴-2-脫氧尿嘧啶)試劑盒是一種嘧啶類似物,可以在DNA合成期整合入DNA雙鏈。通過以上原理圖的對比,大家不難發(fā)現(xiàn),EdU法檢測細胞增殖,無須抗體,無變性步驟,保持細胞形態(tài)和DNA完整性,是一種簡單,可靠,省事的創(chuàng)新方法。但是,現(xiàn)在依然有很多研究者們依然沒有得到細胞增殖檢測*行之有效,節(jié)約反應(yīng)時間的方法。Abbkine的EdU檢測試劑盒有兩個型號,分別匹配的是兩種不同的熒光通道,細胞增殖成像分析試劑盒(EdU法)(綠色熒光),KTA2030,488通道;細胞增殖成像分析試劑盒(EdU法)(橘紅色熒光),KTA2031,549通道。北京品質(zhì)好的EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢