Thioredoxin-NP-27是一種腸激酶的底物,用于檢測腸激酶的活性。它是由硫氧還蛋白和NP-27融合而成,中間通過腸激酶的酶切位點(DDDDK)連接。這種底物在經(jīng)過腸激酶酶切后,可以通過SDS-PAGE電泳觀察到分子量分別為18kDa和27kDa的兩條帶。腸激酶是一種高度專一性識別Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列的蛋白酶,它在Lys的C端水解多肽。腸激酶可以將胰蛋白酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橐让?,也可以將帶有這個識別序列的融合蛋白切開。在37℃,16小時內(nèi)將0.5mg的反應(yīng)底物Thioredoxin-NP-27切割為NP-27達95%所需的酶量定義為一個單位。腸激酶的活性單位定義為在37℃,16小時內(nèi)將0.5毫克的Thioredoxin-NP-2795%降解為NP-27所需要的酶量。這種酶在基因工程產(chǎn)品開發(fā)中具有廣泛的應(yīng)用,特別是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂。Thioredoxin-NP-27產(chǎn)品的優(yōu)勢在于它符合GB/T41907-2022標準,適用于腸激酶活性檢測的底物。產(chǎn)品保存條件為-30~-15℃,運輸條件為≤0℃,以確保其穩(wěn)定性和活性。使用時,應(yīng)按照產(chǎn)品說明進行操作,并注意安全防護措施。Pfu Master Mix (2x)(With Dye)在復(fù)雜模板擴增中的表現(xiàn) 其優(yōu)化的緩沖液和酶組合能夠高效擴增高GC含量。浙江類人源膠原蛋白技術(shù)服務(wù)臨床前研究
關(guān)于粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratiamarcescens)的基因組編輯,雖然搜索結(jié)果中沒有直接提到具體的基因編輯技術(shù)或方法,但提供了一些與該細菌相關(guān)的研究信息,這些信息可能對理解其基因組特性和潛在的基因編輯應(yīng)用有所幫助。1.粘質(zhì)沙雷氏菌是一種機會性的病原體,同時也能染多種宿主,包括昆蟲和植物,并且對植物具有致病性或促進生長的作用。2.研究表明,粘質(zhì)沙雷氏菌的全基因組富含輔助成分,被認為是開放的,并且通過全基因組關(guān)聯(lián)方法(pan-GWAS)預(yù)測了與人類、昆蟲和植物三個宿主群體正相關(guān)的基因簇。3.粘質(zhì)沙雷氏菌的某些菌株具有拮抗植物病原的活性,例如FS14菌株在全基因組測序分析中發(fā)現(xiàn)了與拮抗特性相關(guān)的基因,如幾丁質(zhì)酶和蛋白酶等。4.粘質(zhì)沙雷氏菌的基因組研究還包括對其進化分析的探討,以及與其他沙雷氏菌種的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系研究。盡管上述信息并未直接涉及基因編輯技術(shù),但它們?yōu)槔斫庹迟|(zhì)沙雷氏菌的基因組背景提供了基礎(chǔ),這對于未來開發(fā)針對該細菌的基因編輯策略可能是有用的。例如,通過基因組測序和分析確定的關(guān)鍵基因簇可能成為基因編輯的潛在靶點。此外,對細菌與宿主相互作用的理解可能有助于設(shè)計更有效的基因編輯方法,以改善其在農(nóng)業(yè)或生物技術(shù)應(yīng)用中的性能。黑龍江九價HPV病毒樣顆粒表達服務(wù)技術(shù)服務(wù)Cre重組酶識別的LoxP位點是一個34bp的特異性DNA序列,包含兩個13bp的反向重復(fù)序列和一個8bp的間隔區(qū)。
臨床前研究中,重組蛋白的功能性驗證是一個關(guān)鍵步驟,用以確保蛋白具有預(yù)期的生物學(xué)活性和穩(wěn)定性。以下是功能性驗證通常包括的一些步驟:1.蛋白表達和純度檢測:-使用SDS-PAGE或Westernblot等方法檢測蛋白的表達水平和純度。2.蛋白定量:-使用BCA、Bradford或UV吸收等方法對蛋白進行定量。3.蛋白折疊和聚集狀態(tài)分析:-使用圓二色譜(CD)、熒光光譜等技術(shù)評估蛋白的二級和三級結(jié)構(gòu)。4.翻譯后修飾驗證:-如果蛋白需要特定的翻譯后修飾(如磷酸化、糖基化),使用相應(yīng)的檢測方法進行驗證。5.生物學(xué)活性測試:-根據(jù)蛋白的功能,設(shè)計體外實驗(如酶活性測定、受體結(jié)合實驗)來測試其生物學(xué)活性。6.細胞水平的功能驗證:-將重組蛋白應(yīng)用于細胞培養(yǎng),觀察其對細胞行為(如增殖、分化、凋亡)的影響。7.體內(nèi)活性評估:-在動物模型中注射重組蛋白,評估其在體內(nèi)的分布、代謝、藥效和毒性。8.免疫原性測試:-評估蛋白在體內(nèi)是否能夠誘導(dǎo)免疫反應(yīng),對于疫苗候選物尤為重要。
10×MOPSRNA緩沖液是一種專為RNA電泳設(shè)計的緩沖液,具有以下科研用途和特點:1.RNA電泳:-10×MOPSRNA緩沖液主要用于RNA電泳,包括甲醛變性電泳和非變性電泳。它提供了一個穩(wěn)定的pH環(huán)境,有助于RNA分子在凝膠中的有效分離。2.高分辨率:-該緩沖液具有高分辨率的特點,能夠清晰地分離不同大小的RNA分子,適用于總RNA、mRNA、小RNA等的分離和分析。3.無酶污染:-10×MOPSRNA緩沖液經(jīng)過RNasefree處理,不含DNA酶和RNA酶,確保在電泳過程中不會對RNA樣品造成降解。4.使用說明:-使用時,通常將10×MOPSRNA緩沖液用DEPC處理水稀釋至1×工作濃度。例如,取100mL的10×MOPS電泳緩沖液,加入20mL37%甲醛溶液,再加入880mLDEPC水,充分混勻,配制成1×MOPS電泳緩沖液。5.保存條件:-10×MOPSRNA緩沖液應(yīng)避光保存,室溫下有效期為1年。見光后緩沖液可能會變黃,但淡黃色不影響使用,顏色過深則不宜使用。6.安全操作:-操作時應(yīng)穿實驗服并戴一次性手套,避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。MOPS對人體有害或有刺激性。Cre重組酶可以通過化學(xué)誘導(dǎo)劑(如他莫昔芬)進行調(diào)控,實現(xiàn)基因表達的開關(guān)控制。
RNA上樣緩沖液簡介RNA上樣緩沖液是分子生物學(xué)實驗中用于RNA電泳分析的一種輔助試劑。它通過提供適當?shù)慕橘|(zhì)和條件,幫助RNA樣品在凝膠中有效遷移和分離。功能樣品沉降:增加樣品的密度,使其更容易沉入凝膠孔中。電泳指示:含有染料,如溴酚藍或二甲苯青,幫助觀察樣品遷移。樣品保護:在電泳過程中保護RNA分子,減少降解。使用方法樣品準備:將RNA樣品與上樣緩沖液混合,通常按1:1的比例。變性處理:對于需要變性的電泳,樣品可與甲醛混合并加熱變性。上樣:將混合后的樣品加入凝膠孔中。電泳:在電場作用下進行電泳,觀察RNA的片段的遷移。保存建議短期:4℃保存,可保持一個月。長期:-20℃保存,可延長有效期至兩年。注意事項:避免RNase污染:在處理RNA樣品時,必須使用無RNase的設(shè)備和耗材,避免RNA降解。操作安全:由于含有甲醛等有害成分,操作時應(yīng)佩戴適當?shù)姆雷o裝備,如手套、口罩和防護眼鏡。染色和檢測:電泳結(jié)束后,可以使用溴乙錠(EtBr)或SYBRGold等核酸染料對凝膠進行染色,然后在紫外光下觀察RNA條帶。RNA上樣緩沖液的使用可以確保RNA樣品在電泳過程中的穩(wěn)定性和均勻遷移,從而獲得準確的電泳結(jié)果。Hot-Start Taq DNA Polymerase是一種經(jīng)過特殊修飾的Taq DNA聚合酶,廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)研究中的PCR擴增。上海九價HPV疫苗開發(fā)服務(wù)技術(shù)服務(wù)技術(shù)服務(wù)
Taq DNA 聚合酶的保真性相對較低,但該產(chǎn)品通過優(yōu)化反應(yīng)體系,限度地減少了錯誤摻入率。浙江類人源膠原蛋白技術(shù)服務(wù)臨床前研究
HPV病毒樣顆粒(Virus-LikeParticles,VLPs)表達服務(wù)技術(shù)是用于生產(chǎn)疫苗的關(guān)鍵技術(shù),它涉及到利用生物技術(shù)手段在宿主細胞中表達HPV的主要衣殼蛋白L1,這些蛋白能夠自組裝成具有病毒樣顆粒結(jié)構(gòu)的VLPs,從而用于疫苗制備。以下是畢赤酵母表達系統(tǒng)在表達HPVVLPs時的一些優(yōu)化策略:1.分子水平策略:通過分子水平的策略,如優(yōu)化密碼子使用,提高基因在畢赤酵母中的表達效率和蛋白質(zhì)構(gòu)象的正確性。2.信號肽篩選:選擇合適的信號肽以提高重組蛋白分泌到培養(yǎng)基中的效率,從而增加VLPs的產(chǎn)量。3.敲除蛋白酶基因:通過基因編輯技術(shù)敲除畢赤酵母中的蛋白酶基因,減少外源蛋白被降解的風險。4.共表達促折疊因子:共表達分子伴侶或促折疊因子,幫助正確折疊和組裝VLPs,提高其穩(wěn)定性和免疫原性。5.多拷貝數(shù)外源基因:使用多拷貝質(zhì)?;蚧蛘霞夹g(shù),提高外源基因的拷貝數(shù),增加蛋白表達量。6.發(fā)酵條件優(yōu)化:通過優(yōu)化發(fā)酵條件,如溫度、pH、碳源等,提高VLPs的表達量和質(zhì)量。7.基因編輯技術(shù):利用CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)對畢赤酵母進行遺傳改造,提高外源蛋白的表達。浙江類人源膠原蛋白技術(shù)服務(wù)臨床前研究