在熒光顯微術(shù)中,不僅蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)感興趣,而且對核酸也感興趣。有時有必要通過檢測細胞核來確定細胞的確切位置或數(shù)量。最常見的DNA染色劑之一是DAPI(4',6-二氨基-2-苯基吲哚),主要與DNA雙螺旋富含A-T的區(qū)域結(jié)合。與未結(jié)合態(tài)相比,DAPI在DNA上的熒光強度增加。染料被UV(紫外線)光激發(fā),比較大激發(fā)波長為358nm。發(fā)射光譜較寬,峰值在461nm。弱熒光也可以檢測到RNA結(jié)合。在這種情況下,發(fā)射轉(zhuǎn)移到500nm。有趣的是,DAPI能夠滲透完整的細胞膜。因此,該染料既可用于固定細胞也可用于活細胞。Super Fluor 555(效果同Alexa Fluor 555)琥珀酰亞胺酯熒光染料。...
羅丹明屬于呫噸族。與市場上的許多其他染料相比,羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性,使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們在聚合物納米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測、活細胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作:分子開關(guān),病毒表面修飾,化學(xué)傳感器,硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)來區(qū)分。由于它們的差異,這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性(例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值)。氨基被剛性化的羅丹明染料無論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率,而在每個氮處具有兩個烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)...
一、體外生物發(fā)光試驗熒光素試劑的制備:D-熒光素,鉀鹽,無菌純水,完全培養(yǎng)基(自行配置)1、用無菌水制備100X熒光素原液(15mg/ml),輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2、將D-luciferin,potassiumsalt溶解于預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基圖像分析前,向細胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液,然后進行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌,0.2μm注:成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。DAPI染色液(DAPI St...
羅丹明屬于呫噸族。與市場上的許多其他染料相比,羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性,使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們在聚合物納米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測、活細胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作:分子開關(guān),病毒表面修飾,化學(xué)傳感器,硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)來區(qū)分。由于它們的差異,這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性(例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值)。氨基被剛性化的羅丹明染料無論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率,而在每個氮處具有兩個烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)...
二、***成像分析:D-熒光素,鉀鹽,D-PBS,不含鈣、鎂1、配制溶液使用無菌D-PBS(w/oCa2+;Mg2+)配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/ml),0.22μm濾膜過濾除菌(避光),分裝后于-20℃或-80℃冷凍保存,避免反復(fù)凍融。使用時4℃融化,實驗前平衡至室溫(避光)2、注射量取決于注射方式,具體如下:注射方式劑量靜脈注射(25-27gauge針頭)按10μl/g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液腹腔注射(25-27gauge針頭)按10μl/g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液肌肉注射(27gauge針頭)50μl,濃度為1-2mg/ml熒光素...
其他細胞結(jié)構(gòu)常用染料生物染料在細胞結(jié)構(gòu)和組分鑒定中有著廣泛的應(yīng)用,除細胞膜研究外,我們經(jīng)常也會對一些其它細胞結(jié)構(gòu)及成分進行探索,例如線粒體、溶酶體、蛋白質(zhì)、細胞核等,而對于不同的細胞結(jié)構(gòu)有不同的染料進行染色細胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液(DAPIStainingSolution)常用于細胞核染色,可將細胞核染成藍色。鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是細胞骨架的染色神器,羅丹明標(biāo)記的Phalloidin(TRITC-Phalloidin)可將細胞染成橙紅色,DAPI與Phalloidin染色液是研究細胞形態(tài)變化時經(jīng)常用到的兩種共染的試劑,染色效果可見A1-E1用TRIT...
一、體外生物發(fā)光試驗熒光素試劑的制備:D-熒光素,鉀鹽,無菌純水,完全培養(yǎng)基(自行配置)1、用無菌水制備100X熒光素原液(15mg/ml),輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2、將D-luciferin,potassiumsalt溶解于預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基圖像分析前,向細胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液,然后進行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌,0.2μm注:成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。脂溶性熒光染料cy3、cy5、...
熒光標(biāo)記技術(shù)是指運用熒光染料與待研究對象結(jié)合,利用它的熒光特性,提供待研究對象相關(guān)信息。熒光標(biāo)記具有操作簡便、高穩(wěn)定性、高靈敏度等優(yōu)勢,使熒光染料在生命科學(xué)研究中應(yīng)用,包括:標(biāo)記活細胞或固定細胞中的蛋白質(zhì)、多肽;作為功能性指示劑表征細胞健康狀況;設(shè)計各種熒光探針,尋找特定蛋白或藥物靶點。應(yīng)用分類:多肽、蛋白、抗體標(biāo)記:氨基標(biāo)記、巰基標(biāo)記、羧基標(biāo)記;***成像:水溶性/脂溶性熒光染料、近紅外I區(qū)/II區(qū)熒光染料南京星葉生物科技有限公司提供不同用途的熒光染料,了解更多(包括但不限于) Super Fluor 488(效果同Alexa Fluor 488)標(biāo)記蛋白。江西熒光染料脂溶PI是...
羅丹明123一種可對活細胞線粒體染色的細胞染色試劑。羅丹明123可透過細胞膜且在活細胞的線粒體內(nèi)聚集,并發(fā)出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測線粒體膜電位,也常用于細胞凋亡檢測。由于細胞內(nèi)ATP的量與羅丹明123的熒光強度之間有相關(guān)性,此熒光染料被應(yīng)用于檢測細胞內(nèi)的ATP。羅丹明123的比較大激發(fā)波長為507nm,比較大發(fā)射波長為525nm。在熒光顯微鏡下觀察,呈現(xiàn)黃綠色熒光。 一:工作液配制用緩沖液或者預(yù)熱的培養(yǎng)液直接稀釋儲存液到需要的工作液濃度(1~20μM),充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據(jù)自身實驗體系進行調(diào)整。【注意】:對于細胞實驗,要控制好總體稀釋倍數(shù),DMSO在...
羰花青染料***用作Di來標(biāo)記細胞、細胞器、脂質(zhì)體、病毒和脂蛋白。長鏈羰花青包括DiO(DiOC18(3))、DiI(DiIC18(3))、DiD(DiIC18(5))和DiR,以及二烷基氨基苯乙烯基染料DiA(4-Di-16-ASP)用于標(biāo)記膜和其他疏水結(jié)構(gòu)。DiIC16(3)具有比DiI(C18)更短的烷基取代基(C16)。它們在脂質(zhì)環(huán)境中具有極高的消光系數(shù)、環(huán)境依賴性熒光和短的激發(fā)態(tài)壽命。它們在室溫下是油狀物,在水中發(fā)出微弱熒光,但當(dāng)摻入膜中或與親脂性生物分子結(jié)合時,它們發(fā)出高熒光且相當(dāng)耐光。這些光學(xué)特性使它們成為細胞質(zhì)膜染色的理想選擇。一旦應(yīng)用于細胞,這些染料就會在質(zhì)膜內(nèi)橫向擴散,導(dǎo)致...
三:貼壁細胞染色1、將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。2、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,吸走過量培養(yǎng)液,但要使表面保持濕潤。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。4、37℃孵育細胞2~20min,不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同??梢?0min作為起始孵育時間,之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。5、吸干染料工作液,用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞,孵育5~10min,然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤。四:結(jié)果檢測樣品可在培養(yǎng)基中進行檢測,可通過熒光顯微鏡成像或流式細胞儀分析。小動物成像熒光染料是一種先進的技術(shù)可以在小動物體內(nèi)實時觀察和研究細胞、...
所需的CY3-NHS酯的量取決于待標(biāo)記蛋白的量,以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例:假設(shè)所需的標(biāo)記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000),用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯,得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL,詳細計算過程如下:1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150,000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3...
熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后,能把短波長的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL較長的可見光波而反射出來,呈閃亮的鮮艷色彩。例如,酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用,也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。其中復(fù)合熒光染料是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)合成的熒光染料,由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復(fù)合染料在受體分子的激發(fā)波長被激發(fā),在供體分子的發(fā)射波長發(fā)射一個光子。熒光染料發(fā)展非常迅速,已開發(fā)的用于科研和臨床應(yīng)用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。熒光染料可以單獨使用,也可...
小動物***成像技術(shù)(invivoimagingtechnology)是利用高靈敏度的光學(xué)檢測儀器直接檢測動物***體內(nèi)的細胞活動和基因行為研究的一類技術(shù),是近年來發(fā)展**快的生命科學(xué)研究方法,是**直接觀察細胞和分子在體內(nèi)行為的新興技術(shù),已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個領(lǐng)域[1]。***動物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。生物發(fā)光是利用熒光素酶報告基因在***內(nèi)表達產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。而熒光發(fā)光成像技術(shù)是將熒光物質(zhì)或熒光物質(zhì)標(biāo)記的小分子物質(zhì)如基因、細胞也可是小分子藥物、抗體、納米材料等導(dǎo)入到***體內(nèi),通過小動物***成像系統(tǒng)的激發(fā)光源激發(fā)...
藻紅蛋白-藻紅蛋白(PE)是一種紅色蛋白色素復(fù)合物,屬于藻膽蛋白家族。它可以在紅藻和隱植物中找到,它作為葉綠素色素的附屬物。在生物科學(xué)中,熒光團可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,例如用于抗原檢測的抗體等,因為它能夠發(fā)出明亮的熒光。由于熒光團往往會很快發(fā)生光漂白,因此很少在熒光顯微鏡中使用。它經(jīng)常用于流式細胞術(shù)?!鶆e藻藍蛋白(APC)-與藻紅蛋白一樣,別藻藍蛋白也屬于藻膽蛋白家族,是從紅藻中分離出來的。在594和633nm的激光線激發(fā)下,熒光團的比較大吸光度在650nm處,而熒光發(fā)射峰在66nm處。與熒光素偶聯(lián)物相比,熒光團的靈敏度已顯示高5至10倍,并具有許多其他有益特性,包括大斯托克斯位移、高水溶性、長波長...
常用抗體標(biāo)記熒光染料的特性及其應(yīng)用 1、FITC:激發(fā)波長488nm,比較大發(fā)射波長525nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細胞儀;2)在流式細胞儀的FL1通道檢測;3)可用于熒光顯微鏡技術(shù)4)熒光強度易受PH值影響,PH值降低時其熒光強度減弱。2、AlexaFluor488:激發(fā)波長488nm,比較大發(fā)射波長519nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細胞儀:2)在流式細胞儀的FL1通道檢測;3)具有超乎尋常的光穩(wěn)定性,非常適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)在較寬的PH值范圍內(nèi)保持穩(wěn)定(PH4~10)。5)南京星葉生物科技有限公司Su...
納米粒子納米顆粒是指尺寸在1到100納米之間的顆粒。由于它們的小尺寸,納米粒子通常用于不同類型的細胞和組織的熒光成像。當(dāng)今生物成像中常用的一些納米材料包括碳點、貴金屬納米顆粒、聚合物點、量子點和熒光摻雜二氧化硅等。在成像中,與其他分子熒光團和探針相比,納米顆粒/納米材料具有多種優(yōu)勢,使其成為理想的選擇。除了提高亮度外,納米粒子是惰性的并且往往分布均勻,這有助于在成像過程中獲得更好的結(jié)果。此外,與各種分子熒光團相比,納米顆粒和納米材料沒有細胞毒性,并且不受非特異性結(jié)合問題的影響。由于這些特性,大多數(shù)熒光納米顆粒(染色納米顆粒)可以內(nèi)化到細胞/組織中,并容易靶向給定部位。Super Flour 系...
羅丹明屬于呫噸族。與市場上的許多其他染料相比,羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性,使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們在聚合物納米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測、活細胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作:分子開關(guān),病毒表面修飾,化學(xué)傳感器,硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)來區(qū)分。由于它們的差異,這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性(例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值)。氨基被剛性化的羅丹明染料無論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率,而在每個氮處具有兩個烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)...
其他細胞結(jié)構(gòu)常用染料生物染料在細胞結(jié)構(gòu)和組分鑒定中有著廣泛的應(yīng)用,除細胞膜研究外,我們經(jīng)常也會對一些其它細胞結(jié)構(gòu)及成分進行探索,例如線粒體、溶酶體、蛋白質(zhì)、細胞核等,而對于不同的細胞結(jié)構(gòu)有不同的染料進行染色細胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液(DAPIStainingSolution)常用于細胞核染色,可將細胞核染成藍色。鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是細胞骨架的染色神器,羅丹明標(biāo)記的Phalloidin(TRITC-Phalloidin)可將細胞染成橙紅色,DAPI與Phalloidin染色液是研究細胞形態(tài)變化時經(jīng)常用到的兩種共染的試劑,染色效果可見A1-E1用TRIT...
CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。它具有出色的熒光性能和良好的生物相容性。Cy5屬于小分子染料,其*大發(fā)射波長為670nm,其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氬離子激光器的流式細胞儀,檢測通道一般是FL4通道。除流式細胞術(shù)外,Cy5同樣適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)。需注意的是,Cy5與單核細胞和粒細胞的非特異性結(jié)合多,實驗結(jié)果容易出現(xiàn)假陽性。Cy5.5含有一個游離胺基,可與多種官能團共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。激發(fā)和發(fā)射的最大值分別為678nm和694nm。Cy5.5已應(yīng)用于各種基于熒光的實驗中。Cy5.5是一種遠紅色(和近紅外)發(fā)射染...
熒光染料標(biāo)記蛋白或肽技術(shù)是一種常見的蛋白質(zhì)體外標(biāo)記技術(shù)。除了GFP等熒光蛋白的融合表達外,目標(biāo)蛋白還可以通過熒光染料標(biāo)記直接進行下游實驗操作,如***跟蹤、細胞分選等。 FITC熒光標(biāo)記的原理是什么? 熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光材料。熒光材料是指具有共軛雙鍵系統(tǒng)化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物。當(dāng)受到紫外線或藍紫光的照射時,它可以被刺激為刺激狀態(tài)。當(dāng)激發(fā)狀態(tài)恢復(fù)到基本狀態(tài)時,它會發(fā)出熒光。蛋白質(zhì)熒光標(biāo)記技術(shù)利用熒光材料的共價結(jié)合在目標(biāo)分子的基團上,利用其熒光特性提供研究對象的信息。 CY7 是一種 CY 染料。CY 為花菁 (Cyanine) 的縮寫,是由奇數(shù)個甲基單元連接的兩個氮原子組成...
SuperFluor活化酯(與Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同)SuperFlour系列熒光探針,具有更強的熒光強度,更廣的pH應(yīng)用范圍(pH4~10),更好的抗淬滅性。在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等熒光染料。1.標(biāo)記效率低——計算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標(biāo)記的熒光團少于4mol有以下原因:1)緩沖液中含有痕量伯銨成分,與染料反應(yīng)降低了標(biāo)記效率。如果蛋白已經(jīng)溶于含氨基的緩沖液(如Tris或氨基乙酸),標(biāo)記前用PBS透析。2)蛋白含量較低(≤1mg/mL)會影響標(biāo)記效率。3)標(biāo)記步驟中加入碳酸氫鈉的作用是將反應(yīng)混合物的...
在1990年代***使用的綠色熒光蛋白(從水母維多利亞水母克隆)及其衍生物(例如藻紅藍蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等)是當(dāng)今生物學(xué)研究中**常用的一些生物熒光團。雖然熒光團可用于在細胞、細菌和各種***中表達質(zhì)粒,但它們的使用有一些缺點,即它可能很耗時,并且在融合時還能夠改變某些細胞蛋白的正常生物學(xué)功能。此外,與許多其他熒光團相比,生物熒光團的光穩(wěn)定性和靈敏度較低。綠色熒光蛋白(GFP)綠色熒光蛋白是當(dāng)下流行的生物熒光團之一,由238個氨基酸組成,其中三個負責(zé)發(fā)出可見綠色熒光的結(jié)構(gòu)。在水母本身中,熒光團與水母發(fā)光蛋白(一種蛋白質(zhì))相互作用,當(dāng)添加鈣時會發(fā)出藍光。通過DNA重組,研究人員可以使用負責(zé)...
異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,F(xiàn)ITC):FITC是應(yīng)用*為***的一種熒光素,經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光,*大發(fā)射波長為525nm。FITC的熒光強度受PH影響較大,常隨著PH的降低而減弱,因此,在使用FITC時需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質(zhì)檢測(b)蛋白質(zhì)和肽的微測序分析(c)使用毛細管區(qū)帶電泳進行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(e)細胞和組織切片中的抗原檢測(f)通過標(biāo)記DNA片段進行細胞凋亡檢測除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯(lián)物制備外,異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光(由于偶聯(lián)后的大消光系數(shù)和高量子產(chǎn)率),使其...
光熱***是另一個吲哚菁綠的重要應(yīng)用領(lǐng)域。在光熱***中,吲哚菁綠可以被引入**組織,并在近紅外激光的照射下吸收光能轉(zhuǎn)化為熱能,從而使**組織受到熱損傷,達到***的效果。吲哚菁綠的熒光性質(zhì)使得其在光熱***中具有很高的選擇性,可以精確地破壞**組織而對正常組織幾乎沒有影響。這種精細的***方式有助于減少***的副作用,提高***效果。吲哚菁綠在生物識別和藥物輸送方面也有廣泛的應(yīng)用。在生物識別中,吲哚菁綠可以與特定的生物分子結(jié)合,通過檢測其熒光信號來實現(xiàn)對這些生物分子的定量分析。這種技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究、藥物篩選和疾病診斷中具有重要的意義。另外,吲哚菁綠還可以作為藥物輸送系統(tǒng)的一部分,將藥物包裹...
SUPERGreenI(10,000×DMSO溶液,電泳級)儲存條件及注意事項4℃避光可保存12個月。本品用DMSO溶解,因DMSO的熔點是18.5℃,使用前請放置到室溫充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特點●無毒性:屬花菁類染料,容易生物降解,無致*毒性?!耢`敏度高:至少可檢出20pgDNA,高于EB染色法25~100倍?!裥旁氡雀撸簶悠窡晒庑盘枏?,背景信號低。●操作簡單:無須脫色或沖洗,即可直接用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀察?!襁m用范圍廣:可適用于多種凝膠電泳方法:瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠電泳、脈沖電場凝膠電泳和毛細管電泳等。●使用方便:對分子生物學(xué)中常用的酶(如:Taq酶、反...
藻紅蛋白-藻紅蛋白(PE)是一種紅色蛋白色素復(fù)合物,屬于藻膽蛋白家族。它可以在紅藻和隱植物中找到,它作為葉綠素色素的附屬物。在生物科學(xué)中,熒光團可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,例如用于抗原檢測的抗體等,因為它能夠發(fā)出明亮的熒光。由于熒光團往往會很快發(fā)生光漂白,因此很少在熒光顯微鏡中使用。它經(jīng)常用于流式細胞術(shù)。※別藻藍蛋白(APC)-與藻紅蛋白一樣,別藻藍蛋白也屬于藻膽蛋白家族,是從紅藻中分離出來的。在594和633nm的激光線激發(fā)下,熒光團的比較大吸光度在650nm處,而熒光發(fā)射峰在66nm處。與熒光素偶聯(lián)物相比,熒光團的靈敏度已顯示高5至10倍,并具有許多其他有益特性,包括大斯托克斯位移、高水溶性、長波長...
Cy5:激發(fā)波長633/635nm,比較大發(fā)射波長670nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氟離子激光器的流式細胞儀;2)在流式細胞儀的FL4通道檢測;3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)同樣為小分子染料,非常適合需小分子染料的流式細胞術(shù),熒光強度低于APC。5)與單核和粒細胞非特異性結(jié)合多,易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。 5、PE:激發(fā)波長488nm,比較大發(fā)射波長575nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氯離子激光器的流式細胞儀:2)在流式細胞儀的FL2通道檢測;3)其熒光泯滅性強,不適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù),但適用于激光共聚焦顯微鏡技術(shù)。 6、PE-TR:激發(fā)波長48...
所需的CY3-NHS酯的量取決于待標(biāo)記蛋白的量,以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例:假設(shè)所需的標(biāo)記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000),用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯,得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL,詳細計算過程如下:1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150,000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3...
注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,從而確定比較高信號檢測時間和信號平臺期。保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲存液過濾除菌后,可以-20℃或-80℃分裝凍存,避免反復(fù)凍融。如果有條件,對儲存液充氮氣或氬氣(防止氧化),穩(wěn)定性和保存時間更長。 注射方式,動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學(xué)曲線,確定比較好信號平臺期和比較好的檢測時間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒有差別,兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻來看,鉀鹽的使用率遠高于鈉鹽,尤其是體內(nèi)實驗。兩者功效相同。 為了您的安全和健康,請穿實驗...