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利用免疫磁珠法分選并鑒定人前列腺*類干細(xì)胞.方法利用免疫磁珠法從人前列腺*細(xì)胞株P(guān)C3中分選CD133+/CD44+細(xì)胞,通過免疫組化,流式細(xì)胞術(shù),CCK8,平板克隆形成實驗及裸鼠成瘤實驗鑒定其表面標(biāo)志物表達(dá)情況及**干細(xì)胞特性.結(jié)果經(jīng)免疫磁珠法分選所得CD133+/CD44+細(xì)胞比例為0.50%;免疫組化及流式顯示其CD44/CD133/整合素α2β1均高表達(dá);其細(xì)胞增殖和克隆形成率高于PC3細(xì)胞;以低密度注射時,其裸鼠體內(nèi)成瘤率明顯高于PC3細(xì)胞.結(jié)論利用免疫磁珠法可從人前列腺*細(xì)胞株P(guān)C3中高效的分選出具有**干細(xì)胞生物學(xué)特性的前列腺*類干細(xì)胞.一個好的免疫磁珠需要具備哪些特點您了解嗎？...

碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺(EDC/NHS)方法在羧基磁珠表面偶聯(lián)抗體,制備可高效分離細(xì)胞的免疫磁珠.方法用EDC和NHS活化磁珠表面羧基,活化的羧基再與抗體上氨基進(jìn)行反應(yīng),從而將抗體偶聯(lián)于磁珠表面,獲得免疫磁珠.使用高性能納米粒度分析儀(HPPS),二辛可酸(BCA)蛋白定量試劑盒,流式細(xì)胞儀,透射電鏡(TEM)表征磁珠的粒徑,磁珠表面聯(lián)接的抗體量及其免疫活性.結(jié)果HPPS檢測磁珠平均水力學(xué)粒徑為110nm;磁珠表面偶聯(lián)52.4μg抗CD11a+抗體/mg磁珠.經(jīng)磁分離后細(xì)胞的流式分析結(jié)果表明,CD11a+免疫磁珠可以有效分離髓系白血病細(xì)胞系(KG-1a)細(xì)胞,免疫磁珠均勻結(jié)合于細(xì)胞表面,...

用多聚抗原肽(multipleantigenpeptides,MAP)包被磁珠制備單表位抗體的方法.方法:通過Fmoc法固相化學(xué)合成UreB的8分支單表位MAP,將其作為免疫原免疫小鼠,獲得多克隆抗血清.將MAP以共價偶聯(lián)的方式包被磁珠制備免疫磁珠(immunomagneticbeads,IB),通過IB從多克隆抗血清中純化單表位抗體,熒光偏振(fluorescencepolarization,FP)法鑒定抗體的特異性,SDS-PAGE鑒定抗體純度,紫外分光光度法測定其回收率.結(jié)果:合成的MAP具有較強的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗體滴度高達(dá)1∶12800.MAP制備免疫磁珠的比較好包被濃度為...

免疫共沉淀檢測（CO-IP）BEENbio提供免疫共沉淀（CO-IP）檢測服務(wù)?？蓪煞N已知蛋白是否存在相互作用進(jìn)行驗證，也可以驗證在總蛋白中是否含有與已知蛋白相互作用的未知蛋白。其實驗方法為將靶蛋白（X）與目的蛋白（Y）在同一細(xì)胞內(nèi)孵育，形成“靶蛋白-目的蛋白”復(fù)合物。將靶蛋白的特異性抗體與復(fù)合物共孵育，形成“抗體-靶蛋白-目的蛋白”復(fù)合物，利用ProterinA/G純化。通過SDS-PAGE銀染，結(jié)合WesternBlot及液相質(zhì)譜等對兩種蛋白之間是否存在相互作用進(jìn)行定性分析。服務(wù)優(yōu)勢?使用銀染技術(shù)，靈敏度是考馬斯亮藍(lán)100倍，SDS-PAGE電泳結(jié)果更加清晰；?擁有液相質(zhì)譜及Forteb...

檢測EPCAM、MUC16兩種抗原在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性。方法分別用羧基磁珠制備EPCAM、MUC16兩種免疫磁珠,分3組:EPCAM免疫磁珠檢測組、MUC16免疫磁珠檢測組、2種磁珠均等混合檢測組。對來源于同一患者的等體積外周血樣本進(jìn)行循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測,HE染色后鑒定檢測值。結(jié)果EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+MUC16免疫磁珠對同體積、同來源樣本檢測值分別為22±11、14±6、28±12個腫瘤細(xì)胞(P0.05),說明檢測效率有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論MUC16與EPCAM在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細(xì)胞中**表達(dá)且存在差異,因此增加MUC16這一***標(biāo)志物可有效...

利用免疫磁珠從SD大鼠坐骨神經(jīng)分離培養(yǎng)獲得大量,高純度雪旺細(xì)胞的方法.[方法]選用4-7dSD大鼠,無菌條件下取雙側(cè)坐骨神經(jīng),解剖鏡下剝離去除神經(jīng)外膜,獲得神經(jīng)束,將神經(jīng)束剪碎至1mm3大小.采用雙酶2次消化法消化,胎牛血清中止消化后,離心并加入DF12培養(yǎng)液培養(yǎng).7d后應(yīng)用免疫磁珠法對細(xì)胞進(jìn)行純化培養(yǎng),培養(yǎng)2d后進(jìn)行傳代接種.培養(yǎng)過程中對細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,計數(shù)及活力測定;MTY法繪制細(xì)胞生長曲線,采用免疫細(xì)胞化學(xué)熒光染色對細(xì)胞進(jìn)行鑒定并且計算所得細(xì)胞純度.[結(jié)果]分離培養(yǎng)所得細(xì)胞即為雪旺細(xì)胞;采用免疫磁珠法能對培養(yǎng)所得雪旺細(xì)胞進(jìn)行純化.純化后雪旺細(xì)胞活力為96%±0.5%,純度98%±1....

免疫磁珠（Immunomagneticbead,IMB）技術(shù)是20世紀(jì)80年代出現(xiàn)的技術(shù)方法。以免疫學(xué)為基礎(chǔ)，滲透到病理、生理、藥理、微生物、生化及分子遺傳學(xué)等各個領(lǐng)域，其在免疫檢測、細(xì)胞分離、生物大分子純化和分子生物學(xué)等方面有著越來越***的使用。免疫磁珠的結(jié)構(gòu)：磁珠是由**金屬顆粒（Fe2O3,Fe3O4）,**外層包裹的高分子材料（如聚苯乙烯、聚氯乙烯）和**外層的功能配基（如-NH2，-COOH、-OH、-CHO）組成。免疫磁珠在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用：1.細(xì)胞分選，2.蛋白質(zhì)/抗體分離與純化。3.核酸分離純化核酸結(jié)合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。4.免疫檢測免疫磁珠由于粒...

免疫磁珠法(MiniMACS)在分離純化外周血CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞亞群中的應(yīng)用.方法:應(yīng)用密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞(Peripheralbloodmononucleatecells,PBMC),采用MiniMACS分別分離和純化39例標(biāo)本外周血PBMC中的CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞,并經(jīng)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞純度和臺盼藍(lán)染色的方法對細(xì)胞活力進(jìn)行評估.結(jié)果:MiniMACS分離外周血CD4+T淋巴細(xì)胞前,后細(xì)胞純度分別為(37.38±5.74)%,(97.75±1.03)%(P〈0.001),CD8+T淋巴細(xì)胞分離純化前后細(xì)胞純度分別為(20.11±6.83)%,(96...

BEENbio鏈霉親和素磁珠本產(chǎn)品是由磁性納米顆粒與高純度的鏈霉親和素共價偶聯(lián)而成。這種微球能用于捕獲生物素標(biāo)記的底物，如抗原、抗體和核酸等。鏈霉親和素(streptavidin)與生物素(biotin)的結(jié)合是***的非共價生物交互作用之一，因此，這也是親和層析法所使用的一種強大工具。生物分子可以與生物素輕松融合，而層析基質(zhì)上固定的鏈霉親和素配體可以與之結(jié)合，而且這種鏈霉親和素-生物素相互作用具有較低的非特異親和性，捕獲所需的底物能夠直接應(yīng)用于后續(xù)實驗。本產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)檢測、核酸純化、核酸固相雜交檢測、細(xì)胞分選等分子生物學(xué)實驗。BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠...

應(yīng)用免疫磁珠法分離篩選人乳牙牙髓干細(xì)胞,并做培養(yǎng)鑒定.方法采用STRO-1為標(biāo)記物以免疫磁珠分離篩選人乳牙牙髓干細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài)及生長情況,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型,并檢測細(xì)胞體外多向分化能力.結(jié)果應(yīng)用免疫磁珠法篩選人乳牙牙髓細(xì)胞可獲得乳牙牙髓干細(xì)胞,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理證明看其生長速度慢于牙髓細(xì)胞,細(xì)胞表型分析證實CD29,CD105高表達(dá),CD34,CD45低表達(dá).礦化誘導(dǎo)和成脂誘導(dǎo)證實STRO-1+乳牙牙髓細(xì)胞具有干細(xì)胞多向分化的能力.結(jié)論免疫磁珠法是有效的分離純化人乳牙牙髓干細(xì)胞的方法.所分離的細(xì)胞具有干細(xì)胞的表型特點及多向分化能力.BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠 C...

免疫磁珠分選CD34+細(xì)胞及臍血中CD34+細(xì)胞含量的意義.[方法]臍血中分離單核細(xì)胞后,采用EasySep正選人CD34+免疫磁珠分選CD34+細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測分選前后CD34細(xì)胞的純度.[結(jié)果]分選前MNC中CD34+細(xì)胞純度為(1.14士0.71)%,分選后CD34+細(xì)胞純度達(dá)到(91.55士4.11)%.[結(jié)論]臍血作為CD347造血干/祖細(xì)胞的來源以及免疫磁珠方法在獲得高純度CD34+細(xì)胞中有重要的意義.免疫磁珠分選CD34+細(xì)胞及臍血中CD34+細(xì)胞含量的意義.[方法]臍血中分離單核細(xì)胞后,采用EasySep正選人CD34+免疫磁珠分選CD34+細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測分選前后CD...

免疫磁珠法(MiniMACS)在分離純化外周血CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞亞群中的應(yīng)用.方法:應(yīng)用密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞(Peripheralbloodmononucleatecells,PBMC),采用MiniMACS分別分離和純化39例標(biāo)本外周血PBMC中的CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞,并經(jīng)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞純度和臺盼藍(lán)染色的方法對細(xì)胞活力進(jìn)行評估.結(jié)果:MiniMACS分離外周血CD4+T淋巴細(xì)胞前,后細(xì)胞純度分別為(37.38±5.74)%,(97.75±1.03)%(P〈0.001),CD8+T淋巴細(xì)胞分離純化前后細(xì)胞純度分別為(20.11±6.83)%,(96...

分離轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓造血干細(xì)胞.運用針對小鼠干細(xì)胞表面特異表達(dá)的干細(xì)胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細(xì)胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測MACS分離后骨髓細(xì)胞中干細(xì)胞(Sca-1陽性細(xì)胞)比例,監(jiān)測細(xì)胞分選效果.結(jié)果顯示MACS分離后骨髓細(xì)胞中Sca-1陽性細(xì)胞所占比例達(dá)85%以上,涂片觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞組成和細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征與FACS所得結(jié)果一致.MACS可以從轉(zhuǎn)基因小鼠全骨髓細(xì)胞中分離出Sca-1陽性的骨髓造血干細(xì)胞,細(xì)胞純度可達(dá)85%以上.免疫磁珠的各種系列應(yīng)用領(lǐng)域還是不一樣的。...

免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細(xì)胞,獲得同質(zhì)性骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.方法:實驗于2004-06/2005-06在東南大學(xué)修復(fù)重建外科研究所實驗室完成.采集正常自愿獻(xiàn)髓者骨髓,淋巴細(xì)胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細(xì)胞,研究其生長曲線,體外擴(kuò)增能力,集落形成能力,細(xì)胞表型,細(xì)胞周期,成骨能力.結(jié)果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細(xì)胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細(xì)胞貼壁生長,相差顯微鏡下STRO-1^+細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞梭形外觀.②生長曲線可分為細(xì)胞生長延滯期,對數(shù)生長期及穩(wěn)定期,細(xì)胞倍增時間為57h.③STRO-1^+細(xì)胞可以在體外擴(kuò)增1...

羥基淀粉沉淀去除臍血紅細(xì)胞和免疫磁珠(MACS)陽性選擇,建立富集,分離臍血CD34+細(xì)胞的簡易實用方法,通過造血祖細(xì)胞集落培養(yǎng)分析其在細(xì)胞因子作用下的增殖潛能,觀察羥基淀粉沉淀對造血細(xì)胞增殖功能的影響.方法:采用羥基淀粉沉淀和改進(jìn)的MACS富集,分離臍血CD34+細(xì)胞,以甲纖半固體造血細(xì)胞培養(yǎng)法觀察其粒-單系細(xì)胞(CFU-GM)和紅系爆式集落(BFU-E)的數(shù)量和特性.結(jié)果:臍血分離前,CD34+細(xì)胞純度為1.5%～3%,MACS分離后其純度可達(dá)85%,羥基淀粉沉淀和MACS分離可達(dá)91%;CD34+造血祖細(xì)胞培養(yǎng)有明顯的增殖,采用IL-3,IL-6,SCF,GM-CSF,EPO等細(xì)胞因子組...

人腦**組織中分離,培養(yǎng),純化和鑒定腦**干細(xì)胞(BTSCs),探討CD133免疫磁珠分選方法獲取BTSCs的可行性及BTSCs的生物學(xué)特性.方法:留取人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤新鮮標(biāo)本,分離獲得腦腫瘤細(xì)胞.應(yīng)用CD133免疫磁珠分選方法純化BTSCs;流式細(xì)胞儀檢測分選陽性率;神經(jīng)球計數(shù)法分析CD133+/-亞群細(xì)胞神經(jīng)球形成情況;免疫熒光方法檢測CD133+/-亞群細(xì)胞表面神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)標(biāo)記物CD133,神經(jīng)巢蛋白(nestin)表達(dá)情況;檢測CD133+/-亞群細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化后細(xì)胞表面分化標(biāo)記物β-TubulinⅢ,GFAP表達(dá)情況.結(jié)果:CD133+亞群細(xì)胞具有干細(xì)胞特性,可形成明顯的神...

免疫磁珠法原代分離純化大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞,并確定其免疫組化特征.方法免疫磁珠法結(jié)合傳統(tǒng)的膠原酶消化及篩網(wǎng)過濾法分離出大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞,采用含有20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng).通過周細(xì)胞的形態(tài)和生長方式初步鑒別,再進(jìn)行細(xì)胞α-SMA,vWF,GFAP抗體免疫組織化學(xué)特征鑒定,及激光共聚焦顯微鏡行周細(xì)胞PDGFR-β和desmin抗體熒光雙標(biāo)觀察.周細(xì)胞生長曲線通過MTT法測定.結(jié)果本法獲得的周細(xì)胞純度可達(dá)98%,并能連續(xù)傳代.原代周細(xì)胞約2～3周融合,傳代后生長和融合速度加快,細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,胞內(nèi)可見絲狀結(jié)構(gòu),無接觸性抑制.免疫組化證實周細(xì)胞胞漿內(nèi)α-SMA蛋白表達(dá)陽性,內(nèi)皮細(xì)胞特異性v...

免疫磁性細(xì)胞分選系統(tǒng)分離純化骨髓衍生肝干細(xì)胞亞群c-Kit^+lin^-。方法:實驗于2006—07/08在南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心完成。6~8周齡的SPF級純系BALB,C雄性小鼠10只,體質(zhì)量18~20g。收集小鼠股骨骨髓細(xì)胞,利用免疫磁性細(xì)胞分選系統(tǒng),通過兩步法分選純化c-Kit^+lin^-:將獲取的lin^-細(xì)胞懸液8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按80μL/10^7加入Buffer重懸細(xì)胞。按20μL/10^7加生物素抗體磁珠,混勻,4℃冰箱孵育15min,按1 mL/10^7加入Buffer洗細(xì)胞1次,8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按50...

免疫磁珠法(MiniMACS)在分離純化外周血CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞亞群中的應(yīng)用.方法:應(yīng)用密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞(Peripheralbloodmononucleatecells,PBMC),采用MiniMACS分別分離和純化39例標(biāo)本外周血PBMC中的CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞,并經(jīng)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞純度和臺盼藍(lán)染色的方法對細(xì)胞活力進(jìn)行評估.結(jié)果:MiniMACS分離外周血CD4+T淋巴細(xì)胞前,后細(xì)胞純度分別為(37.38±5.74)%,(97.75±1.03)%(P〈0.001),CD8+T淋巴細(xì)胞分離純化前后細(xì)胞純度分別為(20.11±6.83)%,(96...

人腦**組織中分離,培養(yǎng),純化和鑒定腦**干細(xì)胞(BTSCs),探討CD133免疫磁珠分選方法獲取BTSCs的可行性及BTSCs的生物學(xué)特性.方法:留取人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤新鮮標(biāo)本,分離獲得腦腫瘤細(xì)胞.應(yīng)用CD133免疫磁珠分選方法純化BTSCs;流式細(xì)胞儀檢測分選陽性率;神經(jīng)球計數(shù)法分析CD133+/-亞群細(xì)胞神經(jīng)球形成情況;免疫熒光方法檢測CD133+/-亞群細(xì)胞表面神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)標(biāo)記物CD133,神經(jīng)巢蛋白(nestin)表達(dá)情況;檢測CD133+/-亞群細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化后細(xì)胞表面分化標(biāo)記物β-TubulinⅢ,GFAP表達(dá)情況.結(jié)果:CD133+亞群細(xì)胞具有干細(xì)胞特性,可形成明顯的神...

免疫磁性細(xì)胞分選系統(tǒng)分離純化骨髓衍生肝干細(xì)胞亞群c-Kit^+lin^-。方法:實驗于2006—07/08在南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心完成。6~8周齡的SPF級純系BALB,C雄性小鼠10只,體質(zhì)量18~20g。收集小鼠股骨骨髓細(xì)胞,利用免疫磁性細(xì)胞分選系統(tǒng),通過兩步法分選純化c-Kit^+lin^-:將獲取的lin^-細(xì)胞懸液8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按80μL/10^7加入Buffer重懸細(xì)胞。按20μL/10^7加生物素抗體磁珠,混勻,4℃冰箱孵育15min,按1 mL/10^7加入Buffer洗細(xì)胞1次,8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按50...

利用免疫磁珠從SD大鼠坐骨神經(jīng)分離培養(yǎng)獲得大量,高純度雪旺細(xì)胞的方法.[方法]選用4-7dSD大鼠,無菌條件下取雙側(cè)坐骨神經(jīng),解剖鏡下剝離去除神經(jīng)外膜,獲得神經(jīng)束,將神經(jīng)束剪碎至1mm3大小.采用雙酶2次消化法消化,胎牛血清中止消化后,離心并加入DF12培養(yǎng)液培養(yǎng).7d后應(yīng)用免疫磁珠法對細(xì)胞進(jìn)行純化培養(yǎng),培養(yǎng)2d后進(jìn)行傳代接種.培養(yǎng)過程中對細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,計數(shù)及活力測定;MTY法繪制細(xì)胞生長曲線,采用免疫細(xì)胞化學(xué)熒光染色對細(xì)胞進(jìn)行鑒定并且計算所得細(xì)胞純度.[結(jié)果]分離培養(yǎng)所得細(xì)胞即為雪旺細(xì)胞;采用免疫磁珠法能對培養(yǎng)所得雪旺細(xì)胞進(jìn)行純化.純化后雪旺細(xì)胞活力為96%±0.5%,純度98%±1....

COIP實驗步驟第三步：免疫共沉淀根據(jù)不同的抗體結(jié)合方式，這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同，但是本質(zhì)是一樣的，都是為了形成抗原-蛋白復(fù)合物。如果直接使用 Protein A/G 結(jié)合的 beads，先進(jìn)行細(xì)胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育，再加入 beads 將蛋白-抗體復(fù)合物拉下來。如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定，或者直接將抗體固定在 beads，則將固定抗體的 beads 與細(xì)胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ，可以降低非特異性結(jié)合，以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。第四步：洗脫與檢...

探討小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞的免疫磁珠負(fù)性分選方法,并對分選后所得細(xì)胞進(jìn)行純度、活力及功能檢測.方法以免疫磁珠負(fù)性分選法從小鼠脾臟細(xì)胞中分離CD8+T細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測所得細(xì)胞的純度,臺盼藍(lán)檢測細(xì)胞活力并用ConA刺激檢測增殖能力.結(jié)果經(jīng)過流式細(xì)胞儀測定免疫磁珠負(fù)性分選后的小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞純度達(dá)到(91.6±3.6)%,臺盼蘭染色細(xì)胞活力為(94.9±3.2)%,ConA刺激72h后有(56.3±1.7)%的細(xì)胞增殖.結(jié)論免疫磁珠負(fù)性分選法能夠分選出高純度的CD8+T細(xì)胞,并且不影響分選靶細(xì)胞的細(xì)胞活力和功能.上海普平生物科技有限公司作為上海一家專業(yè)的免疫磁珠供應(yīng)。安徽protein A...

抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,并進(jìn)行初步應(yīng)用。方法采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備抗熒光素單克隆抗體;制備腹水,經(jīng)50%硫酸銨粗提后,再經(jīng)陰離子交換樹脂DE52進(jìn)一步純化單克隆抗體;采用氧化共沉淀法制備納米磁性粒子;乳液聚合法制備羧基磁性微球;用碳二亞胺將抗熒光素單克隆抗體共價偶聯(lián)于磁性微球表面,制備抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠。用制備的免疫磁珠檢測乙肝表面抗原,并與市售ELISA試劑盒的檢測結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果共獲得5株雜交瘤細(xì)胞株,其中1F12細(xì)胞株分泌的抗體效價、相對親和力較高,特異性較好;純化的1F12株單抗的純度達(dá)95%,蛋白含量為2.4mg/ml,ELISA效價為106,相對親和力為0.2m...

免疫磁珠法分離細(xì)胞是基于細(xì)胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合，在外加磁場中，通過抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在磁場中，無該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒有磁性，不在磁場中停留，從而使細(xì)胞得以分離。免疫磁珠應(yīng)用分為正選法和負(fù)選法：正選法－磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞負(fù)選法－磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞，游離于上清液的細(xì)胞為所需細(xì)胞，一般而言，負(fù)選法比正選法的磁珠用量大磁珠：大小在0.1－0.45mm包被了生產(chǎn)的高質(zhì)量單抗磁珠已為白細(xì)胞亞群的分選所優(yōu)化將包被了特異性單抗的BDIMag磁珠加入細(xì)胞懸液，磁珠特異性地與有相應(yīng)抗原的細(xì)胞亞群結(jié)合，通過分離得到的連有磁...

COIP實驗步驟第三步：免疫共沉淀根據(jù)不同的抗體結(jié)合方式，這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同，但是本質(zhì)是一樣的，都是為了形成抗原-蛋白復(fù)合物。如果直接使用 Protein A/G 結(jié)合的 beads，先進(jìn)行細(xì)胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育，再加入 beads 將蛋白-抗體復(fù)合物拉下來。如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定，或者直接將抗體固定在 beads，則將固定抗體的 beads 與細(xì)胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ，可以降低非特異性結(jié)合，以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。第四步：洗脫與檢...

免疫磁珠分離法純化抗血清的實驗條件,并與A蛋白親和層析法比較純化效果,以求得到一種簡便,快速,高效的純化IgG方法.結(jié)果表明:從5只新西蘭兔獲得210 mL試管凝集效價高達(dá)1:5 120的兔抗鰻弧菌抗血清,磁珠與IgG結(jié)合10 min達(dá)到平衡,其比較大結(jié)合量為0.227 mg/mL;免疫磁珠分離法與A蛋白親和層析法得到的IgG純度都很高,經(jīng)過SDS-PAGE電泳都只得到25 ku和55 ku左右的兩條帶;免疫磁珠分離法得到的抗體ELISA效價高于A蛋白親和層析法;免疫磁珠分離法反應(yīng)所需時間(10 min)小于A蛋白親和層析法所需的20 min,其得率(11.5 mg/mL)也高于A蛋白親和層析...

免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽性細(xì)胞,獲得同質(zhì)性骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.方法:實驗于2004-06/2005-06在東南大學(xué)修復(fù)重建外科研究所實驗室完成.采集正常自愿獻(xiàn)髓者骨髓,淋巴細(xì)胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細(xì)胞,研究其生長曲線,體外擴(kuò)增能力,集落形成能力,細(xì)胞表型,細(xì)胞周期,成骨能力.結(jié)果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細(xì)胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細(xì)胞貼壁生長,相差顯微鏡下STRO-1^+細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞梭形外觀.②生長曲線可分為細(xì)胞生長延滯期,對數(shù)生長期及穩(wěn)定期,細(xì)胞倍增時間為57h.③STRO-1^+細(xì)胞可以在體外擴(kuò)增1...

免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的方法.方法將術(shù)中取得的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本,通過剪切,消化和吹打成單細(xì)胞懸液,篩網(wǎng)過濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133^+細(xì)胞,用神經(jīng)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細(xì)胞克隆能力的細(xì)胞球,取第3代進(jìn)行誘導(dǎo)分化,分化前后用免疫細(xì)胞熒光化學(xué)方法鑒定**干細(xì)胞及分化后細(xì)胞.結(jié)果免疫磁珠分選出的CD133^+細(xì)胞,可懸浮生長并形成神經(jīng)干細(xì)胞樣細(xì)胞球,有較強的增殖能力,干細(xì)胞標(biāo)志物巢蛋白(nestin)陽性,分化后細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)元小管相關(guān)蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質(zhì)細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白,CD133^+陰性,并具有**的核型...