用多聚抗原肽(multipleantigenpeptides,MAP)包被磁珠制備單表位抗體的方法.方法:通過(guò)Fmoc法固相化學(xué)合成UreB的8分支單表位MAP,將其作為免疫原免疫小鼠,獲得多克隆抗血清.將MAP以共價(jià)偶聯(lián)的方式包被磁珠制備免疫磁珠(immunomagneticbeads,IB),通過(guò)IB從多克隆抗血清中純化單表位抗體,熒光偏振(fluorescencepolarization,FP)法鑒定抗體的特異性,SDS-PAGE鑒定抗體純度,紫外分光光度法測(cè)定其回收率.結(jié)果:合成的MAP具有較強(qiáng)的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗體滴度高達(dá)1∶12800.MAP制備免疫磁珠的比較好包被濃度為100mg/L,包被效率比較高可達(dá)79%.應(yīng)用MAP免疫磁珠從抗血清中純化得到的單表位抗體,經(jīng)鑒定與其他抗原表位無(wú)反應(yīng)性,其純度為95%,抗體的回收率為5.8%.結(jié)論:MAP包被的磁珠可快速分離純化出針對(duì)某一抗原表位的特異性抗體,其性質(zhì)類似單克隆抗體.這一方案在快速制備少量高特異性抗體中具有廣闊的應(yīng)用前景.買免疫磁珠就找上海普平生物科技有限公司！湖北anti-Flag COIP免疫磁珠銷售

磁珠分離細(xì)胞STRO-1+的DPSC、EMSC中HNK-1、Nestin的表達(dá),進(jìn)一步了解DPSC的表型特點(diǎn)及與EMSC的相關(guān)性,為今后研究提供較為純化的細(xì)胞來(lái)源。方法采用間接免疫磁珠分離法獲得DPSC、EMSC,間接免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)抗原HNK-1、Nestin的表達(dá)。結(jié)果磁珠分離前后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),大約有5%的DPSC為STRO-1+的細(xì)胞,大約有1%的EMSC為STRO-1+的細(xì)胞;STRO-1+的DPSC免疫熒光檢測(cè)同時(shí)表達(dá)HNK-1(++)、Nestin(+),STRO-1+的EMSC免疫熒光檢測(cè)顯示也同時(shí)表達(dá)HNK-1(++)、Nestin(++)。結(jié)論免疫磁珠分離法獲得STRO-1+陽(yáng)性的DPSC共表達(dá)EMSC的標(biāo)記HNK-1和Nestin,進(jìn)一步說(shuō)明二者作為間充質(zhì)來(lái)源的干細(xì)胞,細(xì)胞表型具有繼承性。浙江protein A/G COIP免疫磁珠市場(chǎng)報(bào)價(jià)免疫磁珠的各種系列應(yīng)用領(lǐng)域還是不一樣的。

免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細(xì)胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來(lái)源多能成體祖細(xì)胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個(gè)核細(xì)胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細(xì)胞通過(guò)CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負(fù)分選,錐蟲(chóng)藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)MACS分選前后細(xì)胞活力.流式細(xì)胞儀鑒定分選后細(xì)胞純度;流式細(xì)胞儀分析培養(yǎng)細(xì)胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達(dá)情況.結(jié)果:通過(guò)MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細(xì)胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細(xì)胞生長(zhǎng)良好,**長(zhǎng)傳代到第20代.分選前后細(xì)胞活力分別為(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,無(wú)明顯差異;流式細(xì)胞儀分析獲取的CD45-,GlyA-細(xì)胞純度大于98%;流式細(xì)胞儀檢測(cè)hMAPCs中CD29陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞比率為99.2%,CD44陽(yáng)性細(xì)胞比率為98.3%,CD34陽(yáng)性細(xì)胞比率為1.2%,HLA-DR陽(yáng)性細(xì)胞比率為5.3%.結(jié)論:CD45,GlyA免疫微磁珠負(fù)分選可從骨髓中分離高純度的hMAPCs;分選后hMAPCs在自行研制的培養(yǎng)基中有較強(qiáng)的增殖能力.

常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)策3：如何避免磁珠在儲(chǔ)存或使用過(guò)程中可能出現(xiàn)的聚集情況？磁珠應(yīng)保存在2～8℃，使用時(shí)應(yīng)避免由于污染而導(dǎo)致的不可逆聚集，或因干燥而導(dǎo)致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發(fā)生聚集屬于正常現(xiàn)象，不影響磁珠的正常使用。在Bindingbuffer和Elutionbuffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、Tween-20或TritonX-100）可有效防止磁珠聚集。經(jīng)過(guò)低pH洗脫操作的磁珠可以用結(jié)合緩沖液洗滌至中性，然后用含有0.1%(v/v)Tween-20的Trisbuffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠，并用超聲波水浴處理2min，即可使磁珠恢復(fù)均勻狀態(tài)，以上處理均不影響磁珠的抗體結(jié)合效率。4：如何解決磁珠易粘附管壁的現(xiàn)象？建議使用低吸附率的耗材進(jìn)行磁珠操作。另外，在緩沖液中添加0.01%～0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、Tween-20或TritonX-100）可以有效降低磁珠對(duì)耗材的粘附。對(duì)于不同的需求我們選擇不同的免疫磁珠系列。

羥基淀粉沉淀去除臍血紅細(xì)胞和免疫磁珠(MACS)陽(yáng)性選擇,建立富集,分離臍血CD34+細(xì)胞的簡(jiǎn)易實(shí)用方法,通過(guò)造血祖細(xì)胞集落培養(yǎng)分析其在細(xì)胞因子作用下的增殖潛能,觀察羥基淀粉沉淀對(duì)造血細(xì)胞增殖功能的影響.方法:采用羥基淀粉沉淀和改進(jìn)的MACS富集,分離臍血CD34+細(xì)胞,以甲纖半固體造血細(xì)胞培養(yǎng)法觀察其粒-單系細(xì)胞(CFU-GM)和紅系爆式集落(BFU-E)的數(shù)量和特性.結(jié)果:臍血分離前,CD34+細(xì)胞純度為1.5%～3%,MACS分離后其純度可達(dá)85%,羥基淀粉沉淀和MACS分離可達(dá)91%;CD34+造血祖細(xì)胞培養(yǎng)有明顯的增殖,采用IL-3,IL-6,SCF,GM-CSF,EPO等細(xì)胞因子組合擴(kuò)增培養(yǎng)9～14d,CD34+細(xì)胞在液體培養(yǎng)中有明顯擴(kuò)增,MACS分離后CD34+細(xì)胞總數(shù)增加39倍,羥基淀粉沉淀和MACS分離可增加45倍.結(jié)論:應(yīng)用羥基淀粉沉淀和改進(jìn)的MACS系統(tǒng)可有效富集,分離臍血CD34+細(xì)胞,羥基淀粉沉淀對(duì)CD34+細(xì)胞的富集,分離無(wú)影響;臍血細(xì)胞分離后作造血祖細(xì)胞培養(yǎng),可產(chǎn)生豐富的CFU-GM和BFU-E,說(shuō)明羥基淀粉沉淀分離的CD34+細(xì)胞的增殖功能優(yōu)于MACS分離CD34+細(xì)胞的增殖功能.免疫磁珠的好處有很多。甘肅蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

免疫磁珠的系列有很多種。湖北anti-Flag COIP免疫磁珠銷售

免疫磁珠細(xì)胞分選方法可以在幾分鐘內(nèi)從復(fù)雜的細(xì)胞混合物中分離出很高純度的細(xì)胞。把細(xì)胞用超級(jí)順磁性的免疫磁珠特異性地標(biāo)記，磁性標(biāo)記完后，把這些細(xì)胞通過(guò)一個(gè)放在強(qiáng)而穩(wěn)定磁場(chǎng)中的分選柱。分選柱里的基質(zhì)造成一個(gè)高梯度磁場(chǎng)。被磁性標(biāo)記的細(xì)胞滯留在柱里而未被標(biāo)記的細(xì)胞則流出。當(dāng)分選柱移出磁場(chǎng)后，滯留柱內(nèi)的磁性標(biāo)記細(xì)胞就可以被洗脫出來(lái)，這樣就完全可以獲得標(biāo)記和未標(biāo)記的兩個(gè)細(xì)胞組份。超順磁性的磁珠的體積很小，其直徑約為50nm，體積約小于真核細(xì)胞的一百萬(wàn)份之一，可與病毒的大小相比。標(biāo)記細(xì)胞上的微型磁珠即使在掃描電鏡照片上也幾乎看不到。磁性抗體和磁性標(biāo)記物間的反應(yīng)可在幾分鐘內(nèi)完成。由于微型磁珠的體積極小，所以不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性壓力，而且使孵育時(shí)間短，操作過(guò)程快。免疫磁珠形成一個(gè)穩(wěn)定的膠體液，它們?cè)诖艌?chǎng)中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大小和它的組成成份（氧化鐵和多糖）使其可被生物降解，且不會(huì)***細(xì)胞或影響細(xì)胞的功能和活力，細(xì)胞的生理功能也不變。磁珠不需要去除，因此，陽(yáng)性分選出的細(xì)胞（即磁性標(biāo)記細(xì)胞）可立即用于分析和隨后的實(shí)驗(yàn)。湖北anti-Flag COIP免疫磁珠銷售

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