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精原干細(xì)胞(spermatogonialstemcells,SSCs)富集純化是利用SSCs進(jìn)行基因修飾新方法等研究的前提基礎(chǔ)。采用免疫磁珠分選法,使用干細(xì)胞抗體CD90.2進(jìn)行小鼠SSCs的純化富集,并采用流式細(xì)胞分析法和定量PCR驗(yàn)證了磁珠分選效率。流式細(xì)胞分析結(jié)果:免疫磁珠分選后SSCs純度為50.11%。熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果:磁珠分選后支持細(xì)胞特異表達(dá)基因GATA4***下調(diào)(6倍)、SSCs表達(dá)基因GFRα-1上調(diào)(6.5倍)、生殖干細(xì)胞特異表達(dá)基因OCT4極***上調(diào)(5.9倍),3個(gè)基因相對(duì)表達(dá)量的變化說(shuō)明,免疫磁珠分選效率為6倍。流式細(xì)胞分析法所產(chǎn)生的偏差可能是受到了未解離磁珠及SSCs本身轉(zhuǎn)基因熒光的影響。BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。黑龍江protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制
戊二醛兩步交聯(lián)法將辣根過(guò)氧化物酶(HRP)結(jié)合于甲胎蛋白 (AFP)抗體上制成酶標(biāo)AFP抗體,質(zhì)量鑒定結(jié)果表明其比活性為200 U/mg,抗體效價(jià)為1: 256,滿足酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)要求;通過(guò)滴定法確定酶標(biāo)AFP抗體的**適工作稀釋度為V(酶標(biāo)抗體): V(磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液)=1: 160;血清用量及孵育時(shí)間的影響實(shí)驗(yàn)表明:血清100 μL,孵育時(shí)間2 h為比較好測(cè)定條件.建立了肝*患者血清AFP免疫磁珠ELISA法的規(guī)范化檢測(cè)程序.初步應(yīng)用實(shí)驗(yàn)顯示:免疫磁珠ELISA法測(cè)定受試健康組血清AFP值 平均為3.9 ng/mL,肝*組血清AFP值平均為316.7 ng/mL,對(duì)肝*診斷陽(yáng)性率為72.0%.批內(nèi)及批間CV值分別為5.05%和8.20%.該項(xiàng)技術(shù)有較高的靈敏度和很好的特異性,操作簡(jiǎn)便,分離快 速,適用于肝*的初期快速診斷.天津anti-Myc COIP免疫磁珠生產(chǎn)廠家空腸彎曲菌免疫磁珠富集方法的建立。
免疫共沉淀檢測(cè)(CO-IP)
BEENbio提供免疫共沉淀(CO-IP)檢測(cè)服務(wù)??蓪?duì)兩種已知蛋白是否存在相互作用進(jìn)行驗(yàn)證,也可以驗(yàn)證在總蛋白中是否含有與已知蛋白相互作用的未知蛋白。其實(shí)驗(yàn)方法為將靶蛋白(X)與目的蛋白(Y)在同一細(xì)胞內(nèi)孵育,形成“靶蛋白-目的蛋白”復(fù)合物。將靶蛋白的特異性抗體與復(fù)合物共孵育,形成“抗體-靶蛋白-目的蛋白”復(fù)合物,利用Proterin A/G純化。通過(guò)SDS-PAGE銀染,結(jié)合Western Blot及液相質(zhì)譜等對(duì)兩種蛋白之間是否存在相互作用進(jìn)行定性分析。
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
? 使用銀染技術(shù),靈敏度是考馬斯亮藍(lán)100倍,SDS-PAGE電泳結(jié)果更加清晰;
? 擁有液相質(zhì)譜及Fortebio等完整配套檢測(cè)設(shè)備,可對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)一步分析;
? 實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行兩次,排除隨機(jī)因素影響,結(jié)果更加可靠;
? 擁有蛋白、抗體等制備平臺(tái),您只需提供序列便可完成全部實(shí)驗(yàn);
小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞的免疫磁珠負(fù)性分選方法,并對(duì)分選后所得細(xì)胞進(jìn)行純度、活力及功能檢測(cè).方法以免疫磁珠負(fù)性分選法從小鼠脾臟細(xì)胞中分離CD8+T細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)所得細(xì)胞的純度,臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞活力并用ConA刺激檢測(cè)增殖能力.結(jié)果經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定免疫磁珠負(fù)性分選后的小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞純度達(dá)到(91.6±3.6)%,臺(tái)盼蘭染色細(xì)胞活力為(94.9±3.2)%,ConA刺激72h后有(56.3±1.7)%的細(xì)胞增殖.結(jié)論免疫磁珠負(fù)性分選法能夠分選出高純度的CD8+T細(xì)胞,并且不影響分選靶細(xì)胞的細(xì)胞活力和功能.BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。
檢測(cè)EPCAM、MUC16兩種抗原在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性。方法分別用羧基磁珠制備EPCAM、MUC16兩種免疫磁珠,分3組:EPCAM免疫磁珠檢測(cè)組、MUC16免疫磁珠檢測(cè)組、2種磁珠均等混合檢測(cè)組。對(duì)來(lái)源于同一患者的等體積外周血樣本進(jìn)行循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè),HE染色后鑒定檢測(cè)值。結(jié)果EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+MUC16免疫磁珠對(duì)同體積、同來(lái)源樣本檢測(cè)值分別為22±11、14±6、28±12個(gè)腫瘤細(xì)胞(P0.05),說(shuō)明檢測(cè)效率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論MUC16與EPCAM在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細(xì)胞中**表達(dá)且存在差異,因此增加MUC16這一***標(biāo)志物可有效提高上皮性卵巢*CTCs檢出數(shù)量。免疫磁珠富集與免疫層析一體化檢測(cè)甲型流感病毒的研究。浙江anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠送貨上門
紅細(xì)胞膜免疫磁珠檢測(cè)成分血中抗A/抗B的研究。黑龍江protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制
常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)策
3: 如何避免磁珠在儲(chǔ)存或使用過(guò)程中可能出現(xiàn)的聚集情況?
磁珠應(yīng)保存在2~8℃,使用時(shí)應(yīng)避免由于污染而導(dǎo)致的不可逆聚 集,或因干燥而導(dǎo)致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發(fā)生聚集屬 于正?,F(xiàn)象,不影響磁珠的正常使用。在Binding buffer和Elution buffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、 Tween-20 或 Triton X-100)可有效防止磁珠聚集。經(jīng)過(guò)低pH洗脫操 作的磁珠可以用結(jié)合緩沖液洗滌至中性,然后用含有0.1% (v/v)Tween-20的Tris buffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠,并用超聲波水浴 處理2min,即可使磁珠恢復(fù)均勻狀態(tài),以上處理均不影響磁珠的抗體 結(jié)合效率。
4: 如何解決磁珠易粘附管壁的現(xiàn)象?
建議使用低吸附率的耗材進(jìn)行磁珠操作。另外,在緩沖液中添加 0.01%~0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或 Triton X-100)可以有效降低磁珠對(duì)耗材的粘附。
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