免疫組化原理及實(shí)驗(yàn)步驟——實(shí)驗(yàn)外包。眾所周知,抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性,即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來,以其作為抗原或半抗原去免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,制備特異性抗體,再用這種抗體(第1抗體)作為抗原去免疫動(dòng)物制備第二抗體,并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合,形成抗原 - 一抗 - 二抗復(fù)合物,將抗原放大,由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無色的,因此,還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分,在顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細(xì)胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量。做免疫組化的目的是什么?山東做得好的免疫組化多少錢
免疫組化在臨床應(yīng)用中,還能及時(shí)準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶。英瀚斯生物專業(yè)做實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),一站式醫(yī)學(xué)科研平臺。采用常規(guī)病理方法難以檢出的實(shí)體瘤轉(zhuǎn)移稱為微小轉(zhuǎn)移灶。在常規(guī)組織切片中,辨別單個(gè)或幾個(gè)轉(zhuǎn)移性cancer細(xì)胞很難,淋巴結(jié)內(nèi)竇性組織細(xì)胞增生與某些cancer的早期轉(zhuǎn)移有時(shí)也不易區(qū)別,而采用免疫組化方法,有助于及時(shí)準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)微小(cancer)轉(zhuǎn)移灶。對乳腺cancer而言主要是腋窩淋巴結(jié)的檢測,淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移患者預(yù)后差,這對進(jìn)一步醫(yī)療和預(yù)后判斷十分有意義。內(nèi)蒙古做得好的免疫組化外包免疫組化的樣本保存要求是什么?
免疫組化中IHC vs ICC的區(qū)別。英瀚斯生物為您說明。除了生物學(xué)來源,IHC和ICC在樣品處理的程度上也有所不同。ICC需要透化,要么通過固定過程,要么是單獨(dú)的透化步驟,這樣抗體才能與細(xì)胞內(nèi)的靶點(diǎn)相結(jié)合。而IHC可能不要單獨(dú)的透化步驟,這取決于切片的厚度和固定方法。包埋在石蠟中的IHC切片必須進(jìn)一步處理,才能進(jìn)行抗體染色。一旦處理好樣品,IHC和ICC的染色操作就幾乎沒什么差異了。當(dāng)然,就染色而言,根據(jù)所使用的抗體來優(yōu)化還是少不了的。
病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說的一句話應(yīng)該就是“做個(gè)免疫組化吧”;不管是臨床醫(yī)師,還是患者,他們問的多的問題則是“為什么要做免疫組化?”病理醫(yī)師通過“特殊染色”來進(jìn)行細(xì)胞的識別。這一做法的依據(jù)是特定細(xì)胞和組織中的成分不同、則化學(xué)性質(zhì)不同,通過染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色。不過,由于組織固定或儲(chǔ)存等,會(huì)造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失,因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展,根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì),則有了現(xiàn)在免疫組化的方法:不同細(xì)胞、不同組織中抗原有一定差異,抗體與被測組織中的特定抗原結(jié)合,進(jìn)而通過一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來。如有相應(yīng)顯色,則證實(shí)可能有被測抗原;無顯色則可能無被測抗原。當(dāng)然,這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”,如抗體的非特異性結(jié)合、非特異性顯色,則容易造成“假陽性”;或者雖有相關(guān)抗原、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等,則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的增加,這些問題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免,前者如各種顯色方法的優(yōu)化;后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化、新型抗體開發(fā)及選擇。病理報(bào)告中的免疫組化到底有什么作用?
免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本是什么樣的?
實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類,前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本**常用、**基本的方法,對于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中優(yōu)先的組織標(biāo)本制作方法。
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免疫組化的局限性。靈敏度高、精確性和特異性是一種理想的cancer標(biāo)記物必須具有的,但至今所發(fā)現(xiàn)的cancer標(biāo)記物還沒有能完全滿足這些標(biāo)準(zhǔn)。某些正常細(xì)胞也分泌一些cancer標(biāo)記物,因此cancer細(xì)胞學(xué)并不是單獨(dú)產(chǎn)生一種標(biāo)記物,即選用一組抗體比單一抗體更有利。在cancer診斷中評估免疫組化的局限性主要在抗體特異性和解釋方面。在免疫組化操作中都必須有適當(dāng)?shù)年栃耘c陰性對照,作為技術(shù)完整性質(zhì)量控制,如對照組被忽略或不理想時(shí),免疫組化染色的結(jié)果要謹(jǐn)慎對待,免疫組化的正確結(jié)果不僅要依靠技術(shù)步驟上規(guī)范化操作,而且有賴于正確的解釋,在報(bào)告免疫組化染色結(jié)果時(shí)不應(yīng)孤立地解釋,應(yīng)考慮到診斷與鑒別診斷、所應(yīng)用的抗體特性、所研究組織性質(zhì),同時(shí)還要注意假陽性與假陰性結(jié)果的干擾。山東做得好的免疫組化多少錢