有人以豬骨為原料,用蛋白酶的酶解反應(yīng)代替?zhèn)鹘y(tǒng)制膠工藝,對(duì)骨膠原的酶解反應(yīng)與酶法制膠工藝進(jìn)行了試驗(yàn)研究。結(jié)果表明:以胃蛋白酶對(duì)骨膠原的提取率比較高(),其次是胰蛋白酶(),接下來(lái)是中性蛋白酶(),現(xiàn)在是堿性蛋白酶()。并且通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)對(duì)胃蛋白酶酶解反應(yīng)中各主要影響因素進(jìn)行了優(yōu)化。試驗(yàn)結(jié)果表明,胃蛋白酶提取的比較好條件是,胃蛋白酶的濃度是1%,在,然后在濃度為10%(w/v)的NaCL溶液中鹽析24h,現(xiàn)在骨膠原的回收率為,骨膠原的提取率為。還有人用胃蛋白酶提取豬皮膠原蛋白,分別在水解0、2、6、10、14、18、22、26h時(shí)對(duì)四種不同胃蛋白酶用量(分別為1%、2%、、3%)的試樣取樣檢測(cè),采用一階HILL方程模擬胃蛋白酶提取豬皮膠原蛋白的進(jìn)程以及胃蛋白酶水解速率的衰減過(guò)程,現(xiàn)在得出2%的胃蛋白酶用量和6-7h的水解時(shí)間提取率比較大。還有人用以新鮮豬皮為原料,在50-52℃的條件下用胰酶進(jìn)行水解,在酶用量為5000:1~10000:1,pH值為9,反應(yīng)2-3h,原料:水為1:2的條件下酶解。結(jié)果表明:總蛋白質(zhì)的提取率≥80%。膠原蛋白肽特有的結(jié)構(gòu)能強(qiáng)勁鎖住水分,防止水分的流失。廣東膠原蛋白肽口服液
采用酶法提取膠原蛋白時(shí),必須嚴(yán)格控制提取條件:首先,酶作用時(shí)間必須適當(dāng)。如果時(shí)間過(guò)短,膠原蛋白就不能充分釋放到提取液中,影響提取率;如果酶作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng),膠原蛋白會(huì)水解過(guò)度,產(chǎn)生過(guò)多的苦味小分子低聚肽,不僅會(huì)增加分離純化的難度,也會(huì)影響膠原蛋白的功能特性和生物活性。其次,酶解溫度要適宜。溫度過(guò)低,酶的作用效果不明顯;溫度過(guò)高會(huì)引起酶的失活和膠原蛋白的變性。據(jù)報(bào)道,當(dāng)介質(zhì)pH略低于中性時(shí),膠原蛋白的變性溫度為40~41℃,當(dāng)介質(zhì)pH為酸性時(shí),膠原蛋白的變性溫度為38~39℃,而且魚(yú)皮膠原蛋白的變性溫度要比豬皮膠原蛋白的變性溫度低7~12℃。所以,如果要使提取的膠原蛋白具有良好的生物活性,在提取過(guò)程中應(yīng)使提取溫度低于變性溫度。第三,需選用適當(dāng)?shù)拿?。一般從陸生哺乳?dòng)物組織中提取膠原蛋白時(shí),采用胃蛋白酶在其較適作用溫度下進(jìn)行提取是合理的,但對(duì)于魚(yú)類等水生動(dòng)物,由于其膠原蛋白的變性溫度比陸生哺乳動(dòng)物低,因此許多蛋白酶便不適用,如果在這些酶的較適作用溫度下提取可能會(huì)破壞膠原蛋白的某些功能特性和生物活性。采用酶法提取膠原蛋白及其多肽的研究主要是從動(dòng)物皮及其加工副產(chǎn)物中。重慶復(fù)合膠原蛋白原液皺紋及細(xì)小皺紋的產(chǎn)生與膠原蛋白的自然流失有關(guān),補(bǔ)充膠原蛋白肽后可直接滲透到皮膚真皮層。
Ⅺ型膠原是異三聚體,其組成為α1(Ⅺ)α2(Ⅺ)α3(Ⅺ),Ⅺ型膠原是軟骨的微量成分,在軟骨膠原纖維的形成和軟骨基質(zhì)的組成中起著重要作用,且常與Ⅱ型膠原共存。陸生生物的軟骨組織較水生生物含量高的多,所以Ⅱ型膠原的研究的對(duì)象大多是陸生生物,雖然在1984年已經(jīng)從鯊魚(yú)的軟骨中分離出來(lái)Ⅱ型膠原,但是從水產(chǎn)動(dòng)物提取Ⅱ型膠原的研究并不多。ⅩⅧ型膠原發(fā)現(xiàn)的相對(duì)較晚,同源性較高,還有不同的亞類,主要存在于肺、肝臟和腎臟等組織中。屬于被稱之為multi-plexin的特殊膠原亞族,含有其他膠原所沒(méi)有的C末端非三螺旋區(qū)(non-triple-heli-cal regions,NC1),這一特殊結(jié)構(gòu)使其與其他只由三螺旋結(jié)構(gòu)組成的膠原相比擁有更好的靈活性。ⅩⅧ型膠原的研究主要集中在醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域,如胚胎中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。
隨著年齡的增長(zhǎng),成纖維細(xì)胞的合成能力下降,若皮膚中缺乏膠原蛋白,膠原纖維就會(huì)發(fā)生聯(lián)固化,使細(xì)胞間粘多糖減少,皮膚便會(huì)失去柔軟、彈性和光澤,發(fā)生老化,同時(shí)真皮的纖維斷裂、脂肪萎縮、汗腺及皮脂腺分泌減少,使皮膚出現(xiàn)色斑、皺紋等一系列老化現(xiàn)象。將其作為活性物質(zhì)用于化妝品中時(shí),后者可以擴(kuò)散到皮膚的深層,其含有的酪氨酸與皮膚中的酪氨酸競(jìng)爭(zhēng),而與酪氨酸酶的催化中心結(jié)合,從而抑制黑色素的產(chǎn)生,使皮膚中的膠原蛋白活性增強(qiáng),保持角質(zhì)層水分以及纖維結(jié)構(gòu)的完整性,促進(jìn)皮膚組織的新陳代謝,對(duì)皮膚產(chǎn)生良好的滋潤(rùn)保濕、消皺美容作用。早在20世紀(jì)70年代初,美國(guó)就率先推出注射用牛膠原,用于淡斑除皺及修復(fù)瘢痕。[172-173]不過(guò)在化妝品中,單純用作營(yíng)養(yǎng)性護(hù)膚類原料通常要求分子量在2KD以下,以讓水解膠原能滲透入皮膚內(nèi)。而護(hù)發(fā)類化妝品除要求水解膠原具有保濕性以外,還應(yīng)具有一定的成膜性,因此,水解膠原的分子量要求會(huì)更高。膠原蛋白就好比一鍋才煮了一會(huì)兒的奶白色雞湯。
水解膠原蛋白和膠原多肽也并不相同,可以近似認(rèn)為是宏觀和微觀的關(guān)系。膠原蛋白分子經(jīng)水解后主要形成相對(duì)分子量較小的膠原多肽,由于膠原蛋白獨(dú)特的三股超螺旋結(jié)構(gòu),性質(zhì)十分穩(wěn)定,一般的加工溫度及短時(shí)間加熱都不能使其分解,從而造成其消化吸收較困難,不易被人體充分利用。水解后其吸收利用率可以提高很多,且可以促進(jìn)食品中的其它蛋白質(zhì)的吸收。膠原多肽除了肽鏈的兩端含有未縮合的末端羧基和氨基外,在側(cè)鏈上還含有Lys的ε-NH2以及Asp和Glu的-COOH。膠原多肽可完全溶解于水(冷水亦可溶解),水溶液低粘度,在60%的高濃度下也有流動(dòng)性,耐酸堿性能好,在酸、堿存在的情況下均無(wú)沉淀;耐高溫性能好,200℃加熱亦無(wú)沉淀,同時(shí)它還具有良好的吸油性、起泡性和吸水性等。需要的膠原蛋白,其實(shí)是一種由3個(gè)氨基酸分子組成的膠原蛋白即“膠原三肽”。河北海參膠原蛋白
在這些酶的較適作用溫度下提取可能會(huì)破壞膠原蛋白的某些功能特性和生物活性。廣東膠原蛋白肽口服液
膠原蛋白在身體中含量非常多,在強(qiáng)度上、結(jié)構(gòu)上和彈性上都起到重要作用,例如在皮膚、骨骼和筋膜中。從分子水平上來(lái)說(shuō),膠原蛋白有獨(dú)特的三螺旋結(jié)構(gòu),每一個(gè)蛋白質(zhì)分子由三個(gè)分開(kāi)的肽鏈組 成。通過(guò)復(fù)雜的化學(xué)活性,這些結(jié)構(gòu)可以組成原纖維,到纖維束,***成為組織。
傷口被描述為“對(duì)組織的解剖或生理功能的破壞”。 在損傷發(fā)生時(shí),一系列涉及膠原的復(fù)雜活動(dòng)啟動(dòng),**終進(jìn)行組織修復(fù)(見(jiàn)上文)。 除了理解上述活動(dòng)之外,對(duì)于臨床醫(yī)生來(lái)說(shuō),了解膠原基質(zhì)與傷口的附著情況非常重要,它可以成為新組織生長(zhǎng)的模板,高效支持新組織生長(zhǎng)。 廣東膠原蛋白肽口服液
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