預處理除膠原蛋白外,動物骨中還含有油脂、多種礦物質和其他雜質,因此在被用于提取膠原蛋白之前必須進行預處理。先剔除動物骨上殘留的肉質和肌腱等雜物,粉碎后用正丁醇或正己烷萃取出骨油?,F在除去骨中無機物以提高膠原蛋白的得率。除去骨中的礦物質可用稀酸或EDTA溶液。有人用原料用5倍質量的,用正乙烷脫脂后再用胃蛋白酶酶解,在加酶量150U/g,pH值,37℃條件下處理120min,然后在固液比1∶6的情況下抽提5h,在此條件下,提取率可達18%;還有人用EDTA溶液()浸泡骨料5d,可有效脫去骨料中的羥基磷灰石。[87-89]膠原蛋白的提取一般有三種方法:一是高壓輔助的物理方法;二是用溶劑預處理結合低溫或熱水抽提的化學方法,根據溶劑的不同,可分為熱水浸提法、酸法、堿法、鹽法;三是用酶的生物化學法。一般來說,高壓輔助和熱水抽提針對明膠的提取,而低溫抽提和酶法針對膠原的提取,但其基本原理都是根據膠原蛋白的特性改變蛋白質所在的外界環(huán)境,把膠原蛋白從其他蛋白質中分離出來。一般膠原蛋白肽的原材料,一般來自于人力喂養(yǎng)豬牛的皮革。安徽骨膠原蛋白肽原液
水解膠原蛋白和膠原多肽也并不相同,可以近似認為是宏觀和微觀的關系。膠原蛋白分子經水解后主要形成相對分子量較小的膠原多肽,由于膠原蛋白獨特的三股超螺旋結構,性質十分穩(wěn)定,一般的加工溫度及短時間加熱都不能使其分解,從而造成其消化吸收較困難,不易被人體充分利用。水解后其吸收利用率可以提高很多,且可以促進食品中的其它蛋白質的吸收。膠原多肽除了肽鏈的兩端含有未縮合的末端羧基和氨基外,在側鏈上還含有Lys的ε-NH2以及Asp和Glu的-COOH。膠原多肽可完全溶解于水(冷水亦可溶解),水溶液低粘度,在60%的高濃度下也有流動性,耐酸堿性能好,在酸、堿存在的情況下均無沉淀;耐高溫性能好,200℃加熱亦無沉淀,同時它還具有良好的吸油性、起泡性和吸水性等。江蘇口服膠原蛋白原料廠家膠原蛋白保持角質層水分及纖維結構的完整性。
膠原的相對分子質量大,電泳圖有3條泳帶,在100kD附近出現的2條泳帶分別是膠原分子的α1鏈和α2鏈,在200kD附近出現的1條泳帶是膠原分子的β鏈。即膠原的每條多肽鏈相對分子質量可達100kD,1個膠原分子相對分子質量為300kD。多肽分子量的測定方法常用SDS-PAGE,凝膠色譜法以及質譜法。有人采用凝膠過濾色譜法測定脫鉻革屑中膠原水解產物分子量分布在。飛行時間質譜法測定比目魚皮膠原寡肽分子量的分布主要集中在~。動物蛋白酶水解后的膠原多肽的分子量在2~7kD,比植物蛋白酶水解的膠原多肽分子量范圍更廣。膠原的熱穩(wěn)定性是指測定其在水系中纖維的熱收縮溫度(Ts),或溶液中分子的熱變性溫度(Td)。Ts和Td之差一般在20~25℃,而Ts值較Td值容易測定。Td還可以表示膠原螺旋被破壞的溫度,另外還與其亞氨基酸(脯氨酸和羥脯氨酸)的含量有關,尤其是羥脯氨酸含量,它們之間存在正相關,冷水性魚類的羥脯氨酸含量比較低,所以冷水性魚類膠原蛋白Td值明顯低于暖水性魚類,而又都低于陸生動物。但魚皮膠原蛋白與魚肉膠原蛋白相比,其真皮的Td要比肌肉的低1℃左右,這與肌肉膠原中脯氨酸的羥基化率較真皮膠原高有關。有人測定了多種魚皮可溶性膠原蛋白的氨基酸組成。
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有人以豬骨為原料,用蛋白酶的酶解反應代替?zhèn)鹘y制膠工藝,對骨膠原的酶解反應與酶法制膠工藝進行了試驗研究。結果表明:以胃蛋白酶對骨膠原的提取率比較高(),其次是胰蛋白酶(),接下來是中性蛋白酶(),現在是堿性蛋白酶()。并且通過單因素和正交試驗對胃蛋白酶酶解反應中各主要影響因素進行了優(yōu)化。試驗結果表明,胃蛋白酶提取的比較好條件是,胃蛋白酶的濃度是1%,在,然后在濃度為10%(w/v)的NaCL溶液中鹽析24h,現在骨膠原的回收率為,骨膠原的提取率為。還有人用胃蛋白酶提取豬皮膠原蛋白,分別在水解0、2、6、10、14、18、22、26h時對四種不同胃蛋白酶用量(分別為1%、2%、、3%)的試樣取樣檢測,采用一階HILL方程模擬胃蛋白酶提取豬皮膠原蛋白的進程以及胃蛋白酶水解速率的衰減過程,現在得出2%的胃蛋白酶用量和6-7h的水解時間提取率比較大。還有人用以新鮮豬皮為原料,在50-52℃的條件下用胰酶進行水解,在酶用量為5000:1~10000:1,pH值為9,反應2-3h,原料:水為1:2的條件下酶解。結果表明:總蛋白質的提取率≥80%。膠原蛋白肽不是普通的膠原蛋白粉。重慶玻尿酸膠原蛋白原料廠家
需要的膠原蛋白,其實是一種由3個氨基酸分子組成的膠原蛋白即“膠原三肽”。安徽骨膠原蛋白肽原液
酸法處理時,反應強烈,水解徹底,多生成氨基酸混合物,而且使用酸提取時,根據酸濃度、水解溫度、水解時間等條件的不同,可以得到分子量不均的膠原水解物。但是在即使中等濃度酸徹底水解過程中色氨酸也會全部被破壞,絲氨酸和酪氨酸也會部分被破壞,且設備腐蝕嚴重。因此,酸法溶出生物醫(yī)用膠原要準確控制酸度、溫度、時間等影響因素。由于各種不足,酸法很少單獨使用,一般和酶法配合。比如以豬皮為原料,在檸檬酸()和胃蛋白酶協同下提取膠原蛋白。在處理后的豬皮中加()處理一段時間,然后再用NaCL鹽析,現在提取率為,提取物保持了完整三股螺旋結構的I型膠原蛋白。還有人以雛雞胸軟骨為原材料,在,在4℃,20000r條件下離心20min,現在應用DEAE-SephadexA-50進行離子交換層析,之后透析,再用NaCL鹽析,現在得到純化的膠原蛋白Ⅱ型。安徽骨膠原蛋白肽原液
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