分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區(qū),(2)380~780nm的可見光區(qū),(3)2.5~25μm(按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì)、可見光分光光度計(jì)(或比色計(jì))、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度,所有儀器應(yīng)按照國家計(jì)量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,定期進(jìn)行校正檢定。消光系數(shù)是被測溶液對(duì)光的吸收大小值。海南超微量超微量分光光度計(jì)蛋白檢測
超微量分光光度計(jì)與傳統(tǒng)分光光度計(jì)相比,前者具備的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)在于(二):
(4)氙氣閃光燈為燈源,代替了氘燈(紫外)和鎢燈(可見),使用壽命更長;
(5)不需要預(yù)熱,可隨時(shí)檢測,檢測時(shí)間短【BIO-DL MicroDrop<5秒】;
(6)顯示吸光度值的同時(shí),程序直接給出濃度值(核酸、蛋白和熒光染料);
(7)占據(jù)實(shí)驗(yàn)室空間體積比傳統(tǒng)分光光度計(jì)小很多【BIO-DL MicroDrop重量:2.1kg】。
上海寶予德科學(xué)儀器有限公司主營超微量分光光度計(jì),歡迎大家來電咨詢!
江蘇操作簡便超微量分光光度計(jì)廠家直銷Micro Drop超微量采用新一代的2048線性CCD檢測單元,擁有更高的靈敏度和精確度。
Micro Drop蛋白質(zhì)檢測功能:
Protein Lowry檢測方式:
Lowry法是蛋白與硫酸銅在堿性環(huán)境下反應(yīng)形成銅-蛋白復(fù)合物。Folin-Ciocalteu試劑可以有效的還原銅復(fù)合物,產(chǎn)生與蛋白量成比例的藍(lán)色產(chǎn)物。檢測該藍(lán)色產(chǎn)物在650nm處的吸光值,并在405nm處做基線校正,計(jì)算得出蛋白的濃度。試驗(yàn)中使用的試劑可以從多個(gè)廠家購買。與其他比色法一樣,Lowry法進(jìn)行蛋白定量檢測前也需要構(gòu)建一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。
推薦使用20μl的蛋白樣品和100μl Lowry試劑來做反應(yīng)。在Micro Drop上可以檢測的樣品濃度范圍為0.20mg/ml到4mg/ml。
按照試劑盒生產(chǎn)廠家的說明來準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品和和構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。確保在所有檢測過程中,每個(gè)樣品的處理時(shí)間及環(huán)境溫度一致??梢詮脑噭┖猩a(chǎn)廠家購買用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(BSA)。
超微量分光光度計(jì)比色法測定蛋白質(zhì)濃度:
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物,比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng),產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。
比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry等幾種方法。
Lowry法:以**早期的Biuret反應(yīng)為基礎(chǔ),并有所改進(jìn)。蛋白質(zhì)與Cu2+反應(yīng),產(chǎn)生藍(lán)色的反應(yīng)物。但是與Biuret相比,Lowry法敏感性更高。缺點(diǎn)是需要順序加入幾種不同的反應(yīng)試劑;反應(yīng)需要的時(shí)間較長;容易受到非蛋白物質(zhì)的影響;含EDTA,Tritonx-100等物質(zhì)的蛋白不適合此種方法。
單光束分光光度計(jì)是由一束經(jīng)過單色器的光,輪流通過參比溶液和樣品溶液,以進(jìn)行光強(qiáng)度測量。
Micro Drop比色皿檢測基本操作:
1. 準(zhǔn)備好兩個(gè)比色皿,一個(gè)加入空白檢測液,一個(gè)加入樣品,保證加入的液體量足夠,能蓋過光束,光束(2mm寬)位置在比色皿底部以上8.5mm的位置,請(qǐng)按照比色皿生產(chǎn)廠家的建議加入液體。
2. 抬起樣品臂,把比色皿插入到儀器中,插入比色皿時(shí)要注意透光面,與儀器上面的光路指向的方向相對(duì)應(yīng)。
3. 在做比色皿檢測時(shí)樣品臂必須放下來。
4. 在Micro Drop軟件上的“選項(xiàng)”框中選擇“使用比色皿”, 插入比色皿,勾選基線校正,設(shè)置相應(yīng)參數(shù)進(jìn)行空白檢測及檢測。
5. 當(dāng)檢測完成后,移出比色皿,倒出樣品,清洗干凈比色皿。
不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。甘肅超微量分光光度計(jì)紫外檢測
超微量分光光度計(jì)已成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。海南超微量超微量分光光度計(jì)蛋白檢測
寶予德超微量分光光度計(jì)使用時(shí)注意小貼士:
(1)測量前將樣品中度混勻(可采用震蕩器或用手指彈震管底)
(2)移液器吸頭插入液面下吸取樣品,可避免吸入氣泡;TIP頭貼著下光纖表面打出樣品,且只按到移液器***擋盡頭,第二擋不要按,可以避免吹出氣泡到樣品中。
(3)每次測量完畢后,用蒸餾水清潔上下光纖端面,這樣可以更好地保證下一次測量的準(zhǔn)確性(主要針對(duì)超高濃度樣品,一般樣品無此要求)。
(4)每次做空白檢測前一定要先用水清潔上下光纖表面,可保證空白檢測準(zhǔn)確。
(5)每次測量的核酸樣品量建議為1-2微升,蛋白樣品建議2微升。 過少可能無法形成水柱,過多可能溢出。
(6)加樣后盡快測量,以防蒸發(fā)濃縮以及灰塵落入,已加樣品不能多次檢測,如需重測需重新滴加同一樣品。
(7)儀器避免陽光直射,避免強(qiáng)風(fēng)吹拂,以避免蒸發(fā)。
(8)連續(xù)測量一段時(shí)間后擦凈樣品,用水清潔上下光纖表面,然后用水或緩沖液進(jìn)行重新空白后再檢測。
(9)清潔光纖端面(上樣基座)時(shí)必須用潔凈質(zhì)軟的實(shí)驗(yàn)室用紙(擦鏡紙等)進(jìn)行輕輕擦拭。
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上海寶予德科學(xué)儀器有限公司主營品牌有寶予德,發(fā)展規(guī)模團(tuán)隊(duì)不斷壯大,該公司生產(chǎn)型的公司。公司致力于為客戶提供安全、質(zhì)量有保證的良好產(chǎn)品及服務(wù),是一家有限責(zé)任公司(自然)企業(yè)。公司擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì),具有移液器,吸頭,酶標(biāo)儀,分光光度計(jì)等多項(xiàng)業(yè)務(wù)。寶予德順應(yīng)時(shí)代發(fā)展和市場需求,通過**技術(shù),力圖保證高規(guī)格高質(zhì)量的移液器,吸頭,酶標(biāo)儀,分光光度計(jì)。