超微量分光光度計主要是用來快速檢測一些樣品,比如蛋白、核酸等,幾乎每一個分析實驗室都離不開分光光度計,那么,超微量分光光度計怎么使用呢?***小編就Micro Drop為例,給大家介紹一下超微量分光光度計使用方法。
在此之前,我們先來了解一下超微量分光光度計的原理,微量分光光度計是利用光源通過光片調(diào)整光坡長,射入樣品液體中,再射入光電檢測器將光能轉(zhuǎn)換成電訊號。由樣本及空白水樣間所吸收之光能量差,與標(biāo)準(zhǔn)液之能量吸收值相比較,便可定樣本中待測物濃度。Micro Drop為一款全光譜波長超微量分光光度計,適用于更寬濃度范圍的樣品檢測,操作簡便,即擦即測。
使用Micro Drop可以很方便的檢測核酸的濃度和質(zhì)量。貴州超微量分光光度計蛋白檢測
Micro Drop比色皿檢測基本操作:
1. 準(zhǔn)備好兩個比色皿,一個加入空白檢測液,一個加入樣品,保證加入的液體量足夠,能蓋過光束,光束(2mm寬)位置在比色皿底部以上8.5mm的位置,請按照比色皿生產(chǎn)廠家的建議加入液體。
2. 抬起樣品臂,把比色皿插入到儀器中,插入比色皿時要注意透光面,與儀器上面的光路指向的方向相對應(yīng)。
3. 在做比色皿檢測時樣品臂必須放下來。
4. 在Micro Drop軟件上的“選項”框中選擇“使用比色皿”, 插入比色皿,勾選基線校正,設(shè)置相應(yīng)參數(shù)進(jìn)行空白檢測及檢測。
5. 當(dāng)檢測完成后,移出比色皿,倒出樣品,清洗干凈比色皿。
吉林超微量分光光度計物質(zhì)對光的選擇性吸收波長,以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。
Micro Drop超微量分光光度計基座的維護(hù):
檢測完樣品后請立即擦除基座上的液體,如不繼續(xù)檢測,請用純水清潔基座,并擦干,這樣溶液或溶劑不會對基座造成損傷。
禁止接觸任何形式的氟化氫(HF),氟離子會溶解基座內(nèi)的石英光纖。
請勿使任何液體進(jìn)入基座與機體之間的縫隙,否則可能會損壞機器。如有液體溢出,請立即擦除。
檢測完樣品后若未及時擦除基座上的液體,或儀器長期使用后,基座表面可能有樣本及其氧化物等雜質(zhì)殘留,可按如下兩種方法***。
1.用純水***基座表面樣本殘留或樣本氧化物等雜質(zhì),步驟方法如下:
1)在底部基座光纖金屬面加3-5ul純水;
2)將翻蓋放下使形成液柱,靜置2-3分鐘;
3)用干凈無絨布將純水擦拭干凈。
2.在純水未能有效***基座表面殘留物的情況下,需用稀鹽酸(0.5M/L)***基座表面樣本殘留或樣本氧化物等雜質(zhì),步驟方法如下:
1)在底部基座光纖金屬面加3-5ul稀鹽酸(0.5M/L);
2)將翻蓋放下使形成液柱,靜置2-3分鐘;
3)用干凈無絨布將稀鹽酸擦拭干凈。
注意:用稀鹽酸(0.5M/L)***光纖頭表面雜質(zhì)后,請務(wù)必用純水再***表面的稀鹽酸殘留液。
超微量分光光度計不僅涵蓋了可見光分光光度計的功能而且也可以進(jìn)行紫外分光光度計的應(yīng)用:
(二)UV-VIS常規(guī)可見-紫外檢測:
全波長超微量分光光度計可以像普通的紫外-可見分光光度計一樣行使功能。如BIO-DL MicroDrop可以顯示從185到910nm的光波下樣品的吸光值。**多可以同時指定檢測40個波長下的吸光值并把數(shù)據(jù)顯示在報告中。
(三)蛋白質(zhì)的直接定量(UV法):
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。
A230是碳水化合物較高吸收峰的吸收波長。
朗伯一比爾(Lambert - Beer)定律是分光光度法定量分析依據(jù)的基本原理。當(dāng)一束單色光(指路由一種顏色的光)通過一均勻的溶液時,一部分被吸收,一部分透過。
朗伯比爾定律:A = abc
其意義為:當(dāng)一束單色光通過一均勻溶液時,溶液對單色光的吸光度與溶液濃度和液層厚度的乘積成正比。
A =abc 中,吸光系數(shù)a,表征吸光物質(zhì)的 靈敏度。a值越大,靈敏度越高。如果濃度的單位為物質(zhì)的量濃度(單位為:mol/L),則吸光系數(shù)a可以寫成ε ,ε稱為摩爾吸光系數(shù)。
由上式可知,當(dāng)溶液層厚度b和吸光系數(shù)a固定時,吸光度A與溶液的濃度成線性關(guān)系。在定量分析時,首先需要測定溶液對不同波長光的吸收情況(吸收光譜),從中確定比較大吸收波長 ,然后以此波長 的光為光源(單色光),進(jìn)行吸光度A的測定,這是朗伯比爾定律用于定量分析的首要條件。
Micro Drop為一款全光譜波長超微量分光光度計。重慶性能穩(wěn)定超微量分光光度計核酸檢測
測試在紫外區(qū)有吸收的樣品時用石英比色皿。貴州超微量分光光度計蛋白檢測
Micro Drop蛋白質(zhì)檢測功能:
Protein Pierce 660nm檢測方式:
Protein Pierce 660nm主要用來定量檢測那些含有還原劑或者去污劑的總蛋白濃度,使用的的試劑/樣品體積比例為15:1。當(dāng)使用基座檢測時,推薦使用4μl樣品和60μl試劑。
按照試劑盒生產(chǎn)廠家的說明來準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品和和構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。確保在所有檢測過程中,每個樣品的處理時間及環(huán)境溫度一致??梢詮脑噭┖猩a(chǎn)廠家購買用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(BSA)。
當(dāng)使用4μl樣品和60μl試劑時,Pierce 660nm可以檢測的濃度范圍為50ug/ml到125ug/ml。
貴州超微量分光光度計蛋白檢測
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