GB29989食品安全國家標準嬰幼兒食品和乳品中左旋肉堿的測定

范圍本標準規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中左旋肉堿的測定方法。本標準適用于嬰幼兒食品和乳品中左旋肉堿的測定。

原理試樣經(jīng)過水提取，用高氯酸沉淀蛋白質(zhì)后過濾。濾液經(jīng)堿皂化后使溶液中結(jié)合態(tài)的左旋肉堿游離出來。左旋肉堿與乙酰輔酶A在乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶的催化下反應(yīng)生成乙酰肉堿和游離的輔酶A。游離的輔酶A和2-硝基苯甲酸反應(yīng)生成黃色物質(zhì)，其顏色深淺與游離的輔酶A含量成正比。因游離的輔酶A與左旋肉堿是等摩爾反應(yīng)關(guān)系，可間接求出試樣中左旋肉堿含量。

試劑和材料注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的三級水。

試劑 高氯酸(HClO4)。 氫氧化鈉(NaOH)。氫氧化鉀(KOH)。 2-硝基苯甲酸(C14H8N2O8S2)。 N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸(C8H18N2O4S)。 乙二胺四乙酸二鈉（C10H14N2Na2·2H2O）。 乙酰輔酶A（AcetylCoA）：在2℃~8℃保存。 乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶(CAT)：在2℃~8℃保存。 上海普譽科貿(mào)有限公司 左旋肉堿測定用值得用戶放心。上海左旋肉堿測定用左旋肉堿測定用試劑左旋肉堿

采用分光光度法測定嬰幼兒奶粉中左旋肉堿的含量.通過對嬰幼兒奶粉中左旋肉堿的測定進行不確定度的評估,表達出了合成標準不確定度和擴展不確定度,為評價左旋肉堿測定結(jié)果的準確和可靠性提供技術(shù)依據(jù).

依據(jù)CNAS-CL07:2011《測量不確定度的要求》,JJF1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》和GB29989-2013《食品安全國家標準嬰幼兒食品和乳品中左旋肉堿的測定》,建立嬰幼兒配方食品中左旋肉堿的測量不確定度的測量模型.根據(jù)模型分析并計算不確定度各個分量,結(jié)果的不確定度以及擴展不確定度.計算得到在嬰幼兒奶粉中左旋肉堿含量為11.2mg/100g時,擴展不確定度為1.21mg/100g,包含因子k為2. 西安肉堿測定用左旋肉堿測定用試劑L肉堿上海普譽科貿(mào)有限公司致力于提供 左旋肉堿測定用，歡迎新老客戶來電！

乙酰輔酶A的提取1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g4℃離心10min，取上清，置冰上待測。2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一），進行冰浴勻漿。8000g4℃離心10min，取上清，置冰上待測。測定步驟1、分光光度計預(yù)熱30min，用蒸餾水于340nm處調(diào)零。2、取920μL工作液和100μL樣本至1mL石英比色皿，混勻，立即記錄340nm處20s的吸光值A(chǔ)1和80s時的吸光值A(chǔ)2，計算ΔA=A2-A1

乙酰輔酶A是能源物質(zhì)代謝的重要中間代謝產(chǎn)物，在體內(nèi)能源物質(zhì)代謝中是一個樞紐性的物質(zhì)。糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營養(yǎng)物質(zhì)通過乙酰輔酶A匯聚成一條共同的代謝通路——三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化，經(jīng)過這條通路徹底氧化生成二氧化碳和水，釋放能量用以ATP的合成。乙酰輔酶A是合成脂肪酸、酮體等能源物質(zhì)的前體物質(zhì)，也是合成膽固醇及其衍生物等生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)。用于乳品肉堿的檢測普譽公司為您提供各種規(guī)格乙酰輔酶A中文名:乙酰輔酶A主體:輔酶A作用:在許多代謝過程中起著關(guān)鍵的作用別名:活化了的乙酸左旋肉堿測定用，就選上海普譽科貿(mào)有限公司，用戶的信賴之選，歡迎您的來電哦！

GB 29989 嬰幼兒食品和乳品中左旋肉堿的測定

熒光光度法

MitsuoMaehara等14(1988)采用一種簡單的熒光法對血清中游離肉堿進行測定,測定原理與分光光度法基本類似。肉堿與乙酷CoA在CAT的催化下反應(yīng)生成乙酷肉堿和COASH，COASH與BIPM耦合生產(chǎn)強熒光物質(zhì)COA-BIPM光強度與肉堿的含量成正比。通過測定熒光強度,可以得知血清中的肉堿含量。該方法的批內(nèi)和批間變異系數(shù)(C分別為5.2%和2.6%,肉堿回收率在98%~113%之間與顯色法的測定結(jié)果相比具有良好的相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)r>0.90)。該方法靈敏度較高,比較低檢測限為10pmol/L。KojiroMatsumoto等[15](1990)開發(fā)了光流動注射法對丙戊酸***的患者血清中的肉堿進行測定。該方法使用了肉堿脫氫酶(CDH)和硫辛酷胺脫氫酶(DS)兩種固定化酶催化兩步反應(yīng)***是肉堿和氧化型輔酶I(NAD+)在CDH的催化下反應(yīng)生成還原型輔酶I(NADH)第二步是NADH和刃天青(C12H7NO4)在DS的催化下反應(yīng)生成物質(zhì)試靈(C12H7NO3)試鹵靈的熒光強度與肉堿的含量成正比。用該方法檢測肉堿時,肉堿的標準曲線在0.1~1.0nmol范圍內(nèi)線性測的激發(fā)光波長和發(fā)光波長分別為560nm和580nm。 左旋肉堿測定用，就選上海普譽科貿(mào)有限公司，有想法可以來我司咨詢！咸陽乳品用左旋肉堿測定用試劑乙酰輔酶A

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GB29989

乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶(CAT)溶液：吸取100μL乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶懸浮液，經(jīng)1500r/min離心10min，棄去上層清液，沉淀用2mL水溶解。臨用時配制。

標準品左旋肉堿標準品（C7H15NO3）：純度≥98%。

標準溶液配制

左旋肉堿標準儲備液（80μg/mL）：準確稱取20mg（精確0.0001g）于102℃±2℃烘箱中烘2h的左旋肉堿，用水定容至250mL容量瓶中。此液置于4℃冰箱中可保存1個月。

左旋肉堿標準工作液：分別吸取左旋肉堿標準儲備液0.5mL、1mL、2mL、3mL、5mL于25mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻。此溶液***于當天使用。

儀器和設(shè)備 分析天平：感量0.1mg。 pH計：精度0.01。 離心機：轉(zhuǎn)速≥1500r/min。 恒溫水浴鍋：溫度可控制在40℃±2℃。 分光光度計。 上海左旋肉堿測定用左旋肉堿測定用試劑左旋肉堿

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