天然培養(yǎng)基:天然培養(yǎng)基是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等。常用的天然有機營養(yǎng)物質包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低,除在實驗室經常使用外,也適于用來進行工業(yè)上大規(guī)模的微生物發(fā)酵生產。組合培養(yǎng)基:合成培養(yǎng)基是根據天然培養(yǎng)基的成分,用化學物質模擬合成、人工設計而配制的培養(yǎng)基。例如,高氏1號培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基等。合成培養(yǎng)基有一定的配方,配制合成培養(yǎng)基時重復性強,但與天然培養(yǎng)基相比其成本較高,微生物在其中生長速度較慢,一般適于在實驗室用來進行有關微生物營養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌種選育及遺傳分析等方面的研究工作。常見的細菌類培養(yǎng)基包括營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、大腸桿菌培養(yǎng)基、金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基等等。改良高氏二號液體培養(yǎng)基
培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質濃度合適時微生物才能生長良好,營養(yǎng)物質濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需,濃度過高時則可能對微生物生長起抑制作用,例如高濃度糖類物質、無機鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進微生物的生長,反而起到抑菌或殺菌作用。另外,培養(yǎng)基中各營養(yǎng)物質之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和(或)代謝產物的形成和積累,其中碳氮比(C/N)的影響較大。嚴格地講,碳氮比指培養(yǎng)基中碳元素與氮元素的物質的量比值,有時也指培養(yǎng)基中還原糖與粗蛋白之比。例如,在利用微生物發(fā)酵生產谷氨酸的過程中,培養(yǎng)基碳氮比為4/1時,菌體大量繁殖,谷氨酸積累少;當培養(yǎng)基碳氮比為3/1時,菌體繁殖受到抑制,谷氨酸產量則大量增加。 心浸液肉湯(Huntoon)HIB培養(yǎng)基培養(yǎng)基的配方也會受到環(huán)境、藥物和其他外部壓力的影響,因此,在實際應用中需要不斷進行調整和改進。
營養(yǎng)培養(yǎng)基(nutrient media) 在基礎培養(yǎng)基中添加一些特殊的營養(yǎng)物質,如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生長因子等,可供營養(yǎng)要求較高的細菌在其中生長。例如鏈球菌、肺炎鏈球菌等需在含血液或血清的培養(yǎng)基中生長;結核分枝桿菌的培養(yǎng)基中須添加雞蛋、馬鈴薯、甘油等。比較常用的營養(yǎng)培養(yǎng)基是血瓊脂平板。增菌培養(yǎng)基(enrichment media) 一般為液體培養(yǎng)基,用于細菌的增菌培養(yǎng),可泛用,也可專門用的,在專門用的增菌培養(yǎng)基中常含有目的菌生長所需要的特殊營養(yǎng)物質或生長因子。
1951年厄爾開發(fā)了供動物細胞體外生長的人工合成培養(yǎng)基(MEM)。合成培養(yǎng)基的種類相當多。合成培養(yǎng)基成分已知,便于對實驗條件的控制。但與天然培養(yǎng)基相比,有些天然的未知成分尚無法用已知的化學成分所替代,因此,細胞培養(yǎng)中使用的基礎合成培養(yǎng)基還必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分,以克服合成培養(yǎng)基的不足。普遍的作法是加入小牛血清。動物血清成分復雜,各種生物大小分子混合在一起,有些成分至今尚未搞清楚。血清對細胞生長很有效,但后期對培養(yǎng)產物的分離、提純以及檢測造會成一定困難。另外高質量的動物血清來源有限,成本高,限制了它的大量使用。無血清培養(yǎng)基不加動物血清,在基礎培養(yǎng)基中加入細胞生長有效因子等。特定的培養(yǎng)基可用于特定的微生物和組織細胞培養(yǎng)。
培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內,以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。各類微生物生長繁殖或產生代謝產物的較適pH條件各不相同,一般來講,細菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內生長,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內生長。值得注意的是,在微生物生長繁殖和代謝過程中,由于營養(yǎng)物質被分解利用和代謝產物的形成與積累,會導致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化,若不對培養(yǎng)基pH條件進行控制,往往導致微生物生長速度下降或(和)代謝產物產量下降。因此,為了維持培養(yǎng)基pH的相對恒定,通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑,常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽(如KH2PO4和K2HPO4)組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性,KH2PO4溶液呈酸性,兩種物質的等量混合溶液的pH為6.8。當培養(yǎng)基中酸性物質積累導致H+濃度增加時,H+與弱堿性鹽結合形成弱酸性化合物,培養(yǎng)基pH不會過度降低;如果培養(yǎng)基中OH-濃度增加,OH-則與弱酸性鹽結合形成弱堿性化合物,培養(yǎng)基pH也不會過度升高。培養(yǎng)基是一種營養(yǎng)物質混合物,可以為細胞提供生長所需的物質。7%無菌脫纖維綿羊全血
培養(yǎng)基種類繁多,根據需求選擇適合的培養(yǎng)基對于成功的微生物培養(yǎng)至關重要。改良高氏二號液體培養(yǎng)基
細胞培養(yǎng)過程中,細胞培養(yǎng)基是不可或缺的,細胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細胞中供給細胞營養(yǎng)和促使細胞生殖增殖的基礎物質,也是培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。通常細胞體外培養(yǎng)時需要加入血清,以維持細胞的生長和存活。而除了血清之外,部分細胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇(β-mercaptoethanol)等成分來維持細胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細胞加入量會有差異,需根據細胞類型判斷。改良高氏二號液體培養(yǎng)基
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