外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）。超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過(guò)程比較費(fèi)時(shí)，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過(guò)密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時(shí)，對(duì)離心時(shí)間極為敏感外泌體提取：密度梯度離心。合肥正規(guī)外泌體提取試劑

外泌體的提取、分離方法：微流控技術(shù)。微流控是利用微納米級(jí)尺寸的管道來(lái)處理和操控流體所涉及的一門技術(shù)，其在外泌體分離方面的應(yīng)用受到越來(lái)越多學(xué)者的關(guān)注。Jie等[16]課題組開發(fā)了一種三維納米結(jié)構(gòu)微流控芯片，微柱陣列通過(guò)化學(xué)沉積將交叉多壁碳納米管功能化，然后其就可以識(shí)別特定的分子(CD63)并利用獨(dú)特拓?fù)浼{米材料高效的捕獲外泌體。Wunsch等[17]利用硅工藝生產(chǎn)納米級(jí)確定性側(cè)向位移(Nano-DLD)芯片，得到了均勻的間隙尺寸，該芯片可以靈敏地將20~110nm的顆粒分離。該研究證明了外泌體基于大小的位移，從而揭示了利用芯片分選和量化納米級(jí)生物膠體的潛力。上海外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗(yàn)，難以普遍普及。

外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡，直徑約為30-200nm，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu)，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞（免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞)，都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA，Exosome可通過(guò)細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞，也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA，甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞，參與細(xì)胞間通訊。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過(guò)程發(fā)揮關(guān)鍵作用，不同細(xì)胞來(lái)源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同，可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物，也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子，它可以通過(guò)外泌體從一個(gè)地方轉(zhuǎn)運(yùn)到另外一個(gè)地方行使基因沉默功能。通過(guò)檢測(cè)外泌體中miRNA表達(dá)變化，可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能

外泌體的形成與鑒定：首先，細(xì)胞膜內(nèi)陷形成一個(gè)杯狀結(jié)構(gòu)，包括細(xì)胞表面蛋白和與細(xì)胞外環(huán)境相關(guān)的可溶性蛋白，導(dǎo)致早期胞內(nèi)體(early-sortingendosome，ESE)的從頭形成，或者是杯狀結(jié)構(gòu)直接和已經(jīng)存在的ESEs融合；trans-高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也能協(xié)助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞內(nèi)體(late-sortingendosomes，LSEs)，較終形成MVBs(也稱為多囊內(nèi)小體)。MVBs是通過(guò)endosome限制膜向內(nèi)凹(即質(zhì)膜雙凹)形成的，這一過(guò)程導(dǎo)致MVBs含有多個(gè)ILVs。MVB可以與溶酶體或自噬體融合，較終降解或與質(zhì)膜融合釋放作為外泌體的ILVs。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白、細(xì)胞內(nèi)蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。使用可截留100KD分子量的膜，通過(guò)離心截留上清中的外泌體，截留完成后色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍。

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超離法是常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。合肥正規(guī)外泌體提取試劑

外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒，組分經(jīng)過(guò)優(yōu)化處理，適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、尿液及其他體液（腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等）中的外泌體提取，并搭配純化過(guò)濾裝置，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項(xiàng)：1.對(duì)于待測(cè)樣品粘度過(guò)大時(shí)，可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋處理。2.當(dāng)血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高，收獲的外泌體顆粒無(wú)法通過(guò)EPF柱純化時(shí)，可用4℃預(yù)冷的1×PBS進(jìn)行稀釋后再通過(guò)EPF柱離心。合肥正規(guī)外泌體提取試劑