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細(xì)胞培養(yǎng)中，需要去除支原體的污染：支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中 普遍的問(wèn)題之一，細(xì)胞庫(kù)中或正在使用的細(xì)胞中，支原體的污染率約為15%-35%。并對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的生理和代謝造成諸多影響： 01/ 爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng) – 阻礙細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖 02/ 改變蛋白質(zhì)、...

ChIP技術(shù)的應(yīng)用： 1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的鑒定：研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。 2. 組蛋白修飾的分布：分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況，這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。 3. DNA甲基化研究：結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究...

Co-IP的實(shí)驗(yàn)步驟： 1. 細(xì)胞裂解：首先，細(xì)胞或組織被裂解，釋放其中的蛋白質(zhì)。 2. 抗體結(jié)合：然后，將特異性抗體（針對(duì)已知蛋白質(zhì)之一的抗體）加入到裂解物中。這些抗體會(huì)特異性地結(jié)合到目標(biāo)蛋白（誘餌蛋白）上。 3. 免疫復(fù)合物形成：抗體...

Co-IP的優(yōu)勢(shì)： 1. 生理相關(guān)性：Co-IP可以在接近生理?xiàng)l件的條件下捕獲蛋白質(zhì)相互作用。 2. 特異性：使用特異性抗體可以提高實(shí)驗(yàn)的特異性。 3. 廣泛應(yīng)用：Co-IP技術(shù)適用于多種樣本類(lèi)型，包括細(xì)胞培養(yǎng)、組織樣本等。 Co-...

免疫沉淀技術(shù)RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的實(shí)驗(yàn)方法基于以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟： 1. 細(xì)胞裂解：首先，細(xì)胞或組織樣本被裂解，以釋放細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和RNA復(fù)合物。 2.抗體特異性結(jié)合：裂解后的樣本中加入針對(duì)特...

免疫沉淀是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的珠子（agarose或Sepharose）孵育，通過(guò)離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物，沉...

細(xì)胞被支原體污染后可能會(huì)出現(xiàn)以下幾種情況： 1. 生長(zhǎng)速度變慢：支原體污染的細(xì)胞生長(zhǎng)速度可能會(huì)減慢，甚至停止生長(zhǎng)。 2. 形態(tài)改變：部分細(xì)胞可能會(huì)變圓，從培養(yǎng)瓶壁脫落。有些細(xì)胞在支原體污染后，形態(tài)變化可能不明顯，但有些細(xì)胞可能會(huì)出現(xiàn)體積增大、細(xì)...

免疫沉淀是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的珠子（agarose或Sepharose）孵育，通過(guò)離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物，沉...

免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟： 1. 樣本準(zhǔn)備 2. 細(xì)胞裂解：使用裂解緩沖液（含有蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)降解）裂解細(xì)胞，釋放蛋白質(zhì)。 3. 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測(cè)定裂解液中蛋白質(zhì)的濃...

免疫沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶(hù)實(shí)驗(yàn)情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專(zhuān)業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁...

ChIP（染色質(zhì)免疫沉淀）實(shí)驗(yàn)是一種用于研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的技術(shù)。以下是ChIP實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法概述： 1. 交聯(lián)：將細(xì)胞與交聯(lián)劑（如1%甲醛）孵育，通常在室溫下進(jìn)行10-15分鐘。 2. 終止交聯(lián)：添加甘氨酸以終止交聯(lián)反應(yīng)，孵育5分鐘。...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟： 1. 樣本準(zhǔn)備 2. 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測(cè)定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。 3. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的...

細(xì)胞庫(kù)支原體檢測(cè)的必要性主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面： 1. 確保細(xì)胞庫(kù)的質(zhì)量與安全性：細(xì)胞庫(kù)的建立需要為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細(xì)胞。支原體檢測(cè)是確保細(xì)胞庫(kù)中細(xì)胞質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。 2. 符合監(jiān)管要求：支原體檢測(cè)是生物制...

對(duì)于同一個(gè)樣品，如果一步法恒溫試劑盒檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，而PCR檢測(cè)為陰性，可能的原因包括： 1. 檢測(cè)的支原體種類(lèi)不同：一步法恒溫試劑盒可能檢測(cè)的支原體種類(lèi)更多，例如可以涵蓋27種支原體，而PCR檢測(cè)可能只針對(duì)常見(jiàn)的12種支原體進(jìn)行檢測(cè)。因此，如果樣品...

支原體的預(yù)防可通過(guò)以下方式： 1. 控制污染源：通過(guò)定期檢測(cè)和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染，確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無(wú)支原體存在，從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 2. 改善無(wú)菌操作技術(shù)：通過(guò)提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識(shí)，避免在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中引入支原體污染...

ChIP技術(shù)的應(yīng)用： 1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的鑒定：研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。 2. 組蛋白修飾的分布：分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況，這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。 3. DNA甲基化研究：結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究...

免疫沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶(hù)實(shí)驗(yàn)情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專(zhuān)業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁...

支原體污染一旦發(fā)生，不僅對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成嚴(yán)重影響，甚至可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果失真。而且支原體污染在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中相當(dāng)常見(jiàn)。因此，預(yù)防措施是確保細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的重要手段。 01/ 良好的無(wú)菌技術(shù)及實(shí)驗(yàn)操作，保證操作不會(huì)引入新的污染 02...

支原體預(yù)防的實(shí)驗(yàn)步驟主要包括以下幾個(gè)方面： 1. 無(wú)菌操作技術(shù)：在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，包括穿戴適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)服、手套，使用無(wú)菌工具和耗材。 2. 環(huán)境控制：保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境清潔，定期消毒工作臺(tái)和實(shí)驗(yàn)室表面，使用層流罩或生物安全柜...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟： 1. 樣本準(zhǔn)備 2. 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測(cè)定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。 3. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的...

對(duì)于同一個(gè)樣品，如果PCR檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性而一步法恒溫檢測(cè)試劑盒結(jié)果為陰性，可能的原因包括： 1. 靈敏度差異：PCR方法通常具有較高的靈敏度，可以檢測(cè)到單個(gè)拷貝的支原體DNA。相比之下，一步法恒溫檢測(cè)試劑盒可能需要更高的支原體拷貝數(shù)才能檢測(cè)...

支原體去除試劑使用后，對(duì)支原體的檢測(cè)可能會(huì)有影響。一些支原體去除試劑通過(guò)特異性地與支原體膜結(jié)合、改變支原體膜的通透性來(lái)殺死支原體，而對(duì)真核細(xì)胞幾乎沒(méi)有影響。然而，某些情況下，去除試劑可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的活力和形態(tài)產(chǎn)生一定的影響，尤其是在去除劑作用期間。此外，如果...

免疫共沉淀分析（Co-IP）實(shí)驗(yàn)原理與IP十分類(lèi)似，基本的技術(shù)都是采用目標(biāo)抗原特異性的固相化抗體；但I(xiàn)P的目標(biāo)是純化單一抗原，而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結(jié)合的蛋白質(zhì)或配體。 在Co-IP實(shí)驗(yàn)中，已知抗原稱(chēng)為誘餌蛋白，與之結(jié)合的蛋白則稱(chēng)為靶蛋白。靶蛋白...

細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測(cè)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果可能由以下原因引起： 1. 擴(kuò)增產(chǎn)物污染：PCR擴(kuò)增產(chǎn)生的大量DNA拷貝若未妥善處理，極微量的污染就可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。 2. 引物設(shè)計(jì)不當(dāng)：引物設(shè)計(jì)不夠特異性，可能會(huì)與非目標(biāo)序列發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。 ...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種利用抗體與特定蛋白質(zhì)結(jié)合的特性，從復(fù)雜樣本中分離和純化目標(biāo)蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方法。這項(xiàng)技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用場(chǎng)景，以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域： 1. 蛋白質(zhì)相互作用分析：通過(guò)免疫...

支原體是一類(lèi)細(xì)菌，由于缺乏細(xì)胞壁，具有靈活的膜結(jié)構(gòu)。這使得支原體的形態(tài)多變，很難在高倍顯微鏡下識(shí)別。并且能夠抵抗壓力、溫度、滲透壓和脫水，對(duì)許多針對(duì)細(xì)胞壁合成的常見(jiàn)抗*素具有抗性。它們的體積非常小，直徑通常在0.15~0.3μm，因此能夠輕易地穿過(guò)過(guò)濾系統(tǒng)...

支原體的預(yù)防可通過(guò)以下方式： 1. 控制污染源：通過(guò)定期檢測(cè)和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染，確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無(wú)支原體存在，從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 2. 改善無(wú)菌操作技術(shù)：通過(guò)提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識(shí)，避免在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中引入支原體污染...

免疫沉淀（Co-IP）實(shí)驗(yàn)中抗體的選擇非常關(guān)鍵，因?yàn)榭贵w的特異性和親和力直接影響到實(shí)驗(yàn)的成功與否。 1. 特異性：抗體應(yīng)當(dāng)對(duì)目標(biāo)蛋白具有高度的特異性，以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。 2. 親和力：抗體對(duì)目標(biāo)蛋白的親和力要足夠...

免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)中抗體的選擇非常關(guān)鍵，因?yàn)榭贵w的特異性和親和力直接影響到實(shí)驗(yàn)的成功與否。 1. 特異性：抗體應(yīng)當(dāng)對(duì)目標(biāo)蛋白具有高度的特異性，以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。 2. 親和力：抗體對(duì)目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高...

細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測(cè)出現(xiàn)假陰性結(jié)果可能由以下原因引起： 1. 樣本質(zhì)量問(wèn)題：如果采集的樣本中含有抑制劑或者樣本在處理、存儲(chǔ)過(guò)程中出現(xiàn)問(wèn)題，可能會(huì)影響PCR反應(yīng)，導(dǎo)致假陰性。 2. 技術(shù)或操作問(wèn)題：實(shí)驗(yàn)操作中的誤差，如樣本處理不當(dāng)、試劑配制錯(cuò)誤、...