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胎牛血清：胎牛血清用于細胞培養(yǎng)已經(jīng)超過半個世紀(jì)了，20世紀(jì)50年代末TheodorePuck在細胞和組織培養(yǎng)中初次加入胎牛血清（FBS）來刺激細胞生長。后來人們發(fā)現(xiàn)，由于胎牛未進食過母乳，所以IgG的含量極低，不會阻礙細胞生長，而且胎牛血清中含有豐富的促進細胞...

Real-time PCR螢光染料摻入法:在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR螢光染料，SYBR螢光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射螢光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何螢光信號，從而保證螢光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。此方法適用于：...

胎牛血清對細胞貼壁中的作用：在細胞培養(yǎng)時，大部分來自實體組織感官的細胞會貼壁。它們在機體內(nèi)時，也是與其他細胞或者細胞外基質(zhì)結(jié)合的，貼壁對維持細胞的良好形態(tài)和促進細胞的增殖有益處。有人培養(yǎng)許旺細胞，發(fā)現(xiàn)貼壁良好的細胞，其增殖率也較高。人的造血干細胞培養(yǎng)，更是需要...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴增特定的DN段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的很大特點是能將微量的DNA大幅增加。因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液，只要能分離出一...

實時定量PCR的系統(tǒng)構(gòu)成及工作原理：熒光定量檢測系統(tǒng)由實時熒光定量PCR儀，實時熒光定量試劑，通用電腦，自動分析軟件等構(gòu)成。設(shè)備由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成，用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設(shè)備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。...

胎牛血清中沉淀物該如何處理?胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但較普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。所有胎牛...

胎牛血清中沉淀物該如何處理?胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但較普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。所有胎牛...

Real-time PCR操作流程：1、收集樣品。2相關(guān)試劑總RNA提取試劑TREzolReagent(RNA提取試劑),M-MLV（cDNA逆轉(zhuǎn)錄酶）,RNA純化試劑,RealqPCRMasterMix（螢光定量PCR預(yù)混試劑）。3實驗儀器螢光定量PCR儀;...

Real-time PCR反應(yīng)：多重連接依賴探針擴增（MLPA):允許用單個引物對擴增多個靶標(biāo)，從而避免多重PCR的分辨率限制。多重聚合酶鏈反應(yīng):由單個PCR混合物中的多個引物組組成，以產(chǎn)生對不同DNA序列特異的不同大小的擴增子。通過同時靶向多個基因，可以從單...

胎牛血清的主要成分有哪些？脂聯(lián)素，有人發(fā)現(xiàn)，將牛脂聯(lián)素注射入C57小鼠，可降低循環(huán)血糖水平和在高脂飲食后提高脂肪清理率。持續(xù)注射牛脂聯(lián)素兩周后，胰島素敏感性和葡萄糖耐受性明顯增強，高脂喂養(yǎng)小鼠肝臟脂質(zhì)堆積減少。這些結(jié)果提供了直接的證據(jù)表明內(nèi)源性牛脂聯(lián)素是一種調(diào)...

Real-time PCR從用途上分可以分為定性分析和定量分析：定量分析可以分為定量和相對定量兩種。定量指的是我們想知道某個基因在初始樣品中具體的拷貝數(shù)或濃度是多少？定量實驗必須使用已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品，必須做標(biāo)準(zhǔn)曲線。而相對定量是指我們想知道某一個基因在不同樣...

胎牛血清應(yīng)該如何保存，可以存放多久？胎牛血清可長期儲存于-20℃冰箱中。倘若把胎牛血清存放在4℃冰箱，請不要超過一個月。如果一次性無法用完一瓶血清，建議將胎牛血清無菌條件下分裝并儲存于-20℃，避免反復(fù)凍融。如何正確地解凍胎牛血清？采用逐步解凍法，將胎牛血清從...

Real-time PCR原理：Real-time PCR主要指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)，然后通過熒光化學(xué)物質(zhì)監(jiān)測每次PCR反應(yīng)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法，之后通過內(nèi)參法或外參法對待測樣品中的特定DNA序列（目的基因）進行定量分析的方法。實驗過程中，這些熒光物...

引物的設(shè)計注意事項：1，引物設(shè)計要跨內(nèi)含子，不能在一個外顯子上（我們的實驗是以cDNA為模板來擴增的，如果有DNA污染的話，因為DNA上含有分子量很大的內(nèi)含子，不可能完成擴增。這對我們消除整個實驗的誤差起很大的作用）。2，引物設(shè)計的時候要盡可能設(shè)計在同一退火溫...

Real-time PCR-傳統(tǒng)定量PCR：1）內(nèi)參照法：在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電...

Real-time PCR鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的常見問題：靶序列變異：如靶序列發(fā)生突變或缺失，影響引物與模板特異性結(jié)合，或因靶序列某段缺失使引物與模板失去互補序列，其PCR擴增是不會成功的。假陽性：出現(xiàn)的PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致，有時其條帶更整齊，亮度更高。引物...

胎牛血清是血液凝固后的液體部分，不含血細胞、纖維蛋白及凝集因子等，含有多種對細胞生長必需的營養(yǎng)因子及大分子物質(zhì)。血清白蛋白是胎牛血清的主要成分。此外，重要的是，胎牛血清中含有大量對細胞生長必需的生長因子。胎牛血清也含有一些小分子物質(zhì)，如氨基酸、糖類、脂類及Ho...

Real-time PCR鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶，不但操作煩瑣，而且價格昂貴，制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展。耐熱DNA聚合酶-Taq酶的發(fā)現(xiàn)對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技...

Real-time PCR從用途上分可以分為定性分析和定量分析：定性分析指的是用于分析待檢測的樣本中是否存在我們想要檢測的成分，即待檢測成分有無的分析。通常，定性分析可以應(yīng)用于病毒以及病原菌的檢測，物種鑒定以及基因分型等。病毒及病原菌檢測，如SARS、H1N1...

Real-time PCR原理：基于探針的化學(xué)法，Real-time PCR應(yīng)用一個或多個熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針檢測PCR擴增產(chǎn)物；依賴熒光能量共振傳遞（FRET）檢測特異性擴增產(chǎn)物，單單檢測特異性擴增產(chǎn)物，DNA及RNA定量；基因表達驗證；等位基因鑒別；SN...

內(nèi)標(biāo)在傳統(tǒng)定量中的作用，由于傳統(tǒng)定量方法都是終點檢測，即PCR到達平臺期后進行檢測，而PCR經(jīng)過對數(shù)期擴增到達平臺期時，檢測重現(xiàn)性極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實驗，所得結(jié)果有很大差異，因此無法直接從終點產(chǎn)物量推算出起始模板量。加入內(nèi)標(biāo)后，可部...

Real-time PCR操作流程：1、收集樣品。2相關(guān)試劑總RNA提取試劑TREzolReagent(RNA提取試劑),M-MLV（cDNA逆轉(zhuǎn)錄酶）,RNA純化試劑,RealqPCRMasterMix（螢光定量PCR預(yù)混試劑）。3實驗儀器螢光定量PCR儀;...

Real-time PCR：Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)...

胎牛血清有必要做熱滅活嗎?實驗證明，經(jīng)過正確處理的熱滅活胎牛血清，對于大多數(shù)的細胞而言都是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至可能因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，從而造成細胞生長速率的降低。經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成...

胎牛血清如何采取?在牛屠宰過程中，如發(fā)現(xiàn)母牛懷孕，就應(yīng)立即將生殖系統(tǒng)從尸體中分離出來，在無菌條件下從子宮中取出小牛，進行臍帶打結(jié)處理，清理羊水并消毒。在胎兒兩肋之間直接插入一根針頭到心臟，在真空的條件下，血液通過導(dǎo)管被抽入無菌的血液收集袋內(nèi)。在沒有真空泵時，也...

Real-time PCR：使用Real-time PCR進行基因檢測,被普遍應(yīng)用于病毒和病原菌檢測、轉(zhuǎn)基因食品檢測、遺傳病基因檢測等領(lǐng)域。一般首先需要利用專業(yè)使用的試劑盒從待檢樣品中提取其核酸（DNAorRNA），并經(jīng)過精制等復(fù)雜的操作（通常稱為前處理操作）...

Real-time PCR實驗注意事項-防止RNA酶污染的措施：1.所有的玻璃器皿均應(yīng)在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或更長時間。2.塑料器皿可用0.1%DEPC水浸泡或用氯仿沖洗（注意：有機玻璃器具因可被氯仿腐蝕，故不能使用）。3.有機玻璃的電泳槽等，可...

Real-time PCR原理：Real-time PCR主要指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)，然后通過熒光化學(xué)物質(zhì)監(jiān)測每次PCR反應(yīng)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法，之后通過內(nèi)參法或外參法對待測樣品中的特定DNA序列（目的基因）進行定量分析的方法。實驗過程中，這些熒光物...

選購胎牛血清：為了保證胎牛血清產(chǎn)品的均一性和穩(wěn)定性，胎牛血清生產(chǎn)需遵循相關(guān)規(guī)定進行操作。一般來說，胎牛血清制備需經(jīng)過以下幾個步驟：采集，離心，分離，無菌過濾，用來制作血清的牛血，是通過采集多頭牛的血液混合而成的，因此，想要在同一批次得到大批量品質(zhì)穩(wěn)定的血清，獲...

膜片鉗使用操作流程及注意事項：1.實驗結(jié)束后必須關(guān)閉實驗室的水電，檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學(xué)必須履行實驗室相關(guān)要求，完成值日等相關(guān)工作（值日生按照實驗室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職）。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉...