三、脂質(zhì)體組成對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響：研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對(duì)不同類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對(duì)不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率不同。Huh7和AGS細(xì)胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1；COS7細(xì)胞是T3P1和T1P1；A549細(xì)胞是T1P1和T1P36。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響：脂質(zhì)體復(fù)合物的形狀會(huì)隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu)，但在所有使用的細(xì)胞系中，特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒有明確的優(yōu)勢(shì)6。四、其他因素的影響血清的影響：對(duì)于某些細(xì)胞，血清的存在會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。如Siha細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)轉(zhuǎn)染效率更高，而在Caco-2細(xì)胞的轉(zhuǎn)染中，血清在本實(shí)驗(yàn)室條件下并不影響轉(zhuǎn)染效率19。細(xì)胞傳代次數(shù)：Caco-2細(xì)胞在2-5次細(xì)胞傳代時(shí)轉(zhuǎn)染效率比較高9。綜上所述，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對(duì)不同類型細(xì)胞的影響存在多方面的差異，包括轉(zhuǎn)染效率、影響因素以及脂質(zhì)體組成等。在進(jìn)行脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要根據(jù)不同的細(xì)胞類型優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，以獲得比較好的轉(zhuǎn)染效果。但似乎找到一種既能改善基因表達(dá)又不影響細(xì)胞、不對(duì)細(xì)胞造成損害的技術(shù)也至關(guān)重要。福建脾轉(zhuǎn)染試劑

陽(yáng)離子聚合物作為轉(zhuǎn)染試劑結(jié)合機(jī)制：以陽(yáng)離子聚合物EZTransCellReagent為例，在優(yōu)化RNA干擾（RNAi）條件的研究中發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)離子聚合物通過與RNA分子結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染14。例如，設(shè)計(jì)針對(duì)GFP的shRNA，使用EZ轉(zhuǎn)染試劑將其轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，shRNA***降低了GFP的表達(dá)。預(yù)稀釋的轉(zhuǎn)染試劑在室溫下以及小核酸的存在可增加轉(zhuǎn)染效率，且在24小時(shí)時(shí)達(dá)到峰值。與環(huán)狀核酸相比，線性核酸與陽(yáng)離子聚合物結(jié)合時(shí)顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率和更高的基因組整合率。作用特點(diǎn)：陽(yáng)離子聚合物介導(dǎo)的RNAi條件優(yōu)化后，為未來(lái)的RNAi研究提供了有用的數(shù)據(jù)。小動(dòng)物轉(zhuǎn)染試劑檢測(cè)并被困在核內(nèi)小體中，從這些囊泡結(jié)構(gòu)中釋放出來(lái)，進(jìn)入核周區(qū)域，后進(jìn)入細(xì)胞核。

    對(duì)基因表達(dá)的影響：在微小RNA-1180轉(zhuǎn)染對(duì)腎*細(xì)胞生長(zhǎng)的影響的研究中，腎*細(xì)胞分為兩組：dsControl組和miR-1180組。實(shí)時(shí)定量（qRT）-PCR檢測(cè)p21mRNA的表達(dá)變化，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-1180后，786-O和ACHN細(xì)胞中p21mRNA水平分別上調(diào)（P〈）和（P〈），p21蛋白表達(dá)趨勢(shì)與qRT-PCR結(jié)果相符，CDK4、CDK6和CyclinD1蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)。同時(shí)，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)細(xì)胞周期變化顯示細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期，MTS結(jié)果顯示細(xì)胞活力明顯降低，集落形成實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞增殖能力降低。結(jié)論是miR-1180能******腎*細(xì)胞中p21蛋白的表達(dá)，并抑制腎*細(xì)胞786-O和ACHN的生長(zhǎng)1。在微小RNA-330-5p過表達(dá)對(duì)宮頸*細(xì)胞C33A中腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子4（TRAF4）基因表達(dá)的抑制作用和對(duì)C33A細(xì)胞增殖的影響的實(shí)驗(yàn)中，通過Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑分別向?qū)m頸*細(xì)胞系C33A瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-330-5p模擬物（設(shè)為實(shí)驗(yàn)組）或者轉(zhuǎn)染miR-NC（設(shè)為對(duì)照組），結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組C33A細(xì)胞中TRAF4mRNA下降（p＜），TRAF4蛋白下降（p＜）。集落形成實(shí)驗(yàn)顯示，實(shí)驗(yàn)組C33A細(xì)胞的增殖能力明顯下降（p＜）。結(jié)論是miR-330-5p可通過降低宮頸*細(xì)胞C33A中TRAF4的表達(dá)抑制宮頸*細(xì)胞C33A的增殖。

    核細(xì)胞、關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）：選擇兩種合成轉(zhuǎn)染試劑（陽(yáng)離子脂質(zhì)商業(yè)試劑LipofectamineRNAiMAX和聚乙烯亞胺（PEI））以及兩種天然衍生轉(zhuǎn)染試劑（多糖殼聚糖（98%脫乙酰化）和透明質(zhì)酸（20%酰胺化）），用于將siRNA遞送到包括髓核細(xì)胞、關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞在內(nèi)的原代間充質(zhì)細(xì)胞中。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（***DH）作為內(nèi)源性模型基因，在轉(zhuǎn)染后第3天和第6天評(píng)估由20nM或200nMsiRNA引起的沉默程度。除了沉默效率外，還評(píng)估了細(xì)胞毒性、DNA含量變化和細(xì)胞分化潛能等非特異性影響。在四種轉(zhuǎn)染試劑中，基于商業(yè)脂質(zhì)體的試劑在20nMsiRNA時(shí)是**有效的siRNA遞送試劑，其次是殼聚糖。使用陽(yáng)離子脂質(zhì)體、殼聚糖和PEI轉(zhuǎn)染顯示出不同程度的活力和DNA含量下降，這取決于所評(píng)估的siRNA劑量和細(xì)胞類型，但與***DH敲低無(wú)關(guān)。一些對(duì)DNA含量的影響并不伴隨著活力的相應(yīng)變化。然而，細(xì)胞周期抑制或進(jìn)展的標(biāo)記基因（如p21和PCNA）的表達(dá)變化不能解釋DNA含量的變化。有趣的是，發(fā)現(xiàn)了***DH活性的非特異性上調(diào)，這***于軟骨細(xì)胞15。肝*細(xì)胞HepG2和：比較兩種人類細(xì)胞模型中兩種轉(zhuǎn)染劑，即基于脂質(zhì)體的Lipofectamine?RNAiMAX和基于聚合物的GenMute?。 RNA 轉(zhuǎn)染試劑在不同實(shí)驗(yàn)環(huán)境下表現(xiàn)出不同的效果。

原代細(xì)胞和干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率通常較低。原代細(xì)胞剛剛從組織中分離出來(lái)，還保留著體內(nèi)復(fù)雜的生理特性，其細(xì)胞膜上的受體和內(nèi)吞機(jī)制等可能不適應(yīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染。例如，原代間充質(zhì)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可能低于10%。干細(xì)胞由于其特殊的自我更新和分化潛能，其細(xì)胞內(nèi)部的信號(hào)通路和膜運(yùn)輸機(jī)制對(duì)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染比較敏感，轉(zhuǎn)染效率也不高。而且在轉(zhuǎn)染過程中，還需要考慮不影響干細(xì)胞的干性，這也增加了轉(zhuǎn)染的難度。

原代細(xì)胞和干細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的毒性反應(yīng)比較敏感。脂質(zhì)體可能會(huì)干擾它們的正常生理功能，如影響干細(xì)胞的自我更新和分化能力。對(duì)于原代細(xì)胞，可能會(huì)改變其原有的表型或者***細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞提前衰老或者死亡。 納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染。肺轉(zhuǎn)染試劑動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場(chǎng)變革。福建脾轉(zhuǎn)染試劑

優(yōu)化電轉(zhuǎn)方法篩選**適電壓和脈沖時(shí)間：不同細(xì)胞種類電轉(zhuǎn)所需的**適電壓和脈沖時(shí)間不同。例如，人成纖維細(xì)胞電轉(zhuǎn)modRNA的**適電壓為440V，**適脈沖時(shí)間為30ms；Hela、293T、3T3細(xì)胞電轉(zhuǎn)**適電壓分別為425V、400V、440V，**適脈沖時(shí)間均為30ms；人/兔外周血來(lái)源的懸浮的單個(gè)核細(xì)胞的**適電壓分別為840V和860V，**適脈沖時(shí)間均為20ms。通過篩選**適電壓和脈沖時(shí)間，可以提高RNA轉(zhuǎn)染效率，同時(shí)證明了電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)染modRNA進(jìn)入細(xì)胞的可行性，且可同時(shí)將兩種modRNA導(dǎo)入同一個(gè)細(xì)胞內(nèi)6。RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細(xì)胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實(shí)現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細(xì)胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和80％以上的活細(xì)胞。GFPRNA對(duì)未刺激的人PBMC或鼠脾細(xì)胞進(jìn)行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細(xì)胞。此外，基因表達(dá)迅速且持久，對(duì)經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細(xì)胞未觀察到不良影響7。福建脾轉(zhuǎn)染試劑