攜帶要轉(zhuǎn)染的特定核酸的載體構(gòu)建可以進(jìn)一步分為病毒載體或質(zhì)粒載體。病毒和質(zhì)粒通過(guò)存在合適的真核啟動(dòng)子促進(jìn)外源轉(zhuǎn)基因的表達(dá)。病毒載體可能在宿主細(xì)胞中觸發(fā)免疫原性反應(yīng)，而非病毒載體的免疫原性相對(duì)較低。需要一種傳遞機(jī)制來(lái)促進(jìn)靶向核酸或載體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中。其中一些需要物理方法，而另一些涉及使用遞送載體，可能是脂質(zhì)載體或非脂質(zhì)載體，以幫助增強(qiáng)載體載體復(fù)合物與宿主細(xì)胞膜之間的接觸，從而促進(jìn)復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞。設(shè)計(jì)和啟動(dòng)轉(zhuǎn)染試驗(yàn)可能具有挑戰(zhàn)性，特別是可供選擇的轉(zhuǎn)染方法或策略種類繁多的情況***式細(xì)胞術(shù)可以更精確地定量表達(dá)特定熒光基因的細(xì)胞，以評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

**近的研究已經(jīng)確定了陽(yáng)離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征，這些特征增強(qiáng)了它們?cè)隗w內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)核酸的能力。這些特征包括陽(yáng)離子頭基團(tuán)及其鄰近的脂肪鏈在主鏈上呈1,2關(guān)系，醚鍵用于橋接脂肪鏈到主鏈，成對(duì)的油基鏈作為疏水系鏈。無(wú)論如何，這些特征雖然不能決定細(xì)胞培養(yǎng)中更好的轉(zhuǎn)染能力，但可以在體內(nèi)實(shí)現(xiàn)更好的核酸遞送。因此，必須謹(jǐn)慎對(duì)待體外和細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果，不能必然地用來(lái)推斷核酸載體在體內(nèi)的潛力。當(dāng)這些囊泡在體內(nèi)引入時(shí)，其他因素(如顆粒直徑)變得更加重要。使用脂質(zhì)體時(shí)遇到的毒性通常與制劑中陽(yáng)離子脂質(zhì)與核酸之間的電荷比、所使用的制劑類型以及所給脂質(zhì)體的劑量密切相關(guān)。較高的電荷比通常對(duì)多種細(xì)胞類型的毒性更大，包括*細(xì)胞系。另外，不同的試劑對(duì)細(xì)胞的毒性程度不同，毒性是細(xì)胞特異性的。目前市面上有超過(guò)30種不同的商用CL制劑品種可供選擇。由于毒性，脂質(zhì)體的體內(nèi)遞送必須盡可能靠近目標(biāo)部位，以盡量減少副作用。海南轉(zhuǎn)染試劑價(jià)格人類原代干細(xì)胞是另一種公認(rèn)的難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染這種細(xì)胞類型的挑戰(zhàn)仍然是效率低和細(xì)胞活力低。

魚(yú)精蛋白作為RNA遞送穩(wěn)定劑具有重要作用，其具體作用機(jī)制主要包括以下幾個(gè)方面：一、保護(hù)RNA免受降解魚(yú)精蛋白是一種天然陽(yáng)離子肽混合物，由于其帶正電荷的特性，可以與帶負(fù)電荷的RNA通過(guò)相反電荷驅(qū)動(dòng)耦合23。在生物系統(tǒng)中，RNA很容易被RNase降解，而魚(yú)精蛋白可以與RNA復(fù)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而保護(hù)RNA免受降解1213。例如，通過(guò)將單鏈RNA（ssRNA）與帶正電荷的蛋白魚(yú)精蛋白復(fù)合，可以穩(wěn)定陰離子RNA1213。二、增強(qiáng)細(xì)胞穿透性魚(yú)精蛋白不僅可以保護(hù)RNA，還能增強(qiáng)RNA的穿透細(xì)胞的能力。魚(yú)精蛋白-RNA復(fù)合物的形成具有雙重功能，一方面保護(hù)RNA不被降解，另一方面增強(qiáng)其穿透進(jìn)入細(xì)胞的能力23。這種增強(qiáng)的細(xì)胞穿透性可能是由于魚(yú)精蛋白的陽(yáng)離子性質(zhì)，使其能夠與細(xì)胞膜相互作用，促進(jìn)RNA的進(jìn)入細(xì)胞2。

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑陽(yáng)離子脂質(zhì)體：如LipofectamineTM2000等陽(yáng)離子脂質(zhì)體是常用的轉(zhuǎn)染試劑。通過(guò)優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，如轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合度、質(zhì)粒質(zhì)量與脂質(zhì)體體積比及轉(zhuǎn)染時(shí)間等，可以提高轉(zhuǎn)染效率。例如，在脂質(zhì)體介導(dǎo)RNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雞成骨細(xì)胞的試驗(yàn)中，當(dāng)轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合達(dá)到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時(shí)轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好，對(duì)細(xì)胞的毒性作用較小4。二、利用天然陽(yáng)離子肽混合物——魚(yú)精蛋白作為穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑：魚(yú)精蛋白不僅可以作為肝素的中和藥物和緩釋胰島素配方中的化合物，還可以用于核酸的細(xì)胞遞送。自***作為轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑使用以來(lái)，魚(yú)精蛋白已被***用作RNA遞送的穩(wěn)定劑。它能保護(hù)RNA免受生物系統(tǒng)內(nèi)的降解，并增強(qiáng)其對(duì)細(xì)胞的穿透能力。例如，魚(yú)精蛋白穩(wěn)定的RNA遞送系統(tǒng)可以根據(jù)***目標(biāo)進(jìn)行調(diào)整，如與靶向抗體融合實(shí)現(xiàn)精確遞送、消化成細(xì)胞穿透肽提高轉(zhuǎn)染效率或與功能性聚合物非共價(jià)混合等。基因是陽(yáng)離子聚合物作為轉(zhuǎn)染劑的主要應(yīng)用。

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是一種常用的將外源基因?qū)爰?xì)胞的方法，脂質(zhì)體大?。褐|(zhì)體的大小也可能影響轉(zhuǎn)染效率。較小的脂質(zhì)體可能更容易進(jìn)入細(xì)胞，但可能攜帶的 DNA 量較少。較大的脂質(zhì)體可能攜帶更多的 DNA，但可能更難進(jìn)入細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)離子脂質(zhì)體的大小與轉(zhuǎn)染效率之間存在一定的關(guān)系。隨著脂質(zhì)體尺寸的增加，轉(zhuǎn)染的主要途徑可能從網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用轉(zhuǎn)變?yōu)橹そ閷?dǎo)的內(nèi)吞作用，同時(shí)也可能觀察到巨胞飲作用。這種變化可能會(huì)影響脂質(zhì)體在細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸和釋放，從而影響轉(zhuǎn)染效率。為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。福建轉(zhuǎn)染試劑效率高

由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場(chǎng)變革。DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

納米顆粒遞送藥物并發(fā)揮功能的能力在很大程度上取決于它們被細(xì)胞攝取的機(jī)制。以蒲公英湯劑體為例，研究發(fā)現(xiàn)親溶酶體物質(zhì)能***抑制蒲公英湯劑體進(jìn)入細(xì)胞；巨胞飲抑制劑細(xì)胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英湯劑體的胞內(nèi)攝入，且呈現(xiàn)劑量依賴性，敲減Rac1和PAK1也有效地抑制其進(jìn)入細(xì)胞。這些結(jié)果提示蒲公英湯劑體通過(guò)內(nèi)吞進(jìn)入A549細(xì)胞且主要由巨胞飲介導(dǎo)26。同理，RNA轉(zhuǎn)染試劑在某些情況下也可能利用巨胞飲途徑進(jìn)入細(xì)胞。電穿孔轉(zhuǎn)染中的內(nèi)吞途徑電穿孔轉(zhuǎn)染是一種用于基因遞送的技術(shù)，在研究其機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，用冰冷介質(zhì)處理或在電穿孔轉(zhuǎn)染前使用內(nèi)吞抑制劑處理三種不同的人類細(xì)胞系（HEK293、HCT116和HT29）。結(jié)果表明，用冰冷介質(zhì)、氯丙嗪或染料木黃酮處理會(huì)***降低所有三種細(xì)胞系的電穿孔轉(zhuǎn)染效率，但阿米洛利處理對(duì)電穿孔轉(zhuǎn)染效率影響不***。對(duì)于用小干擾RNA（siRNA）處理的細(xì)胞，只有敲低網(wǎng)格蛋白重鏈（CLTC）會(huì)導(dǎo)致所有三種細(xì)胞系的電穿孔轉(zhuǎn)染效率降低。這些數(shù)據(jù)表明，網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用在電穿孔轉(zhuǎn)染中起著重要作用27。DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑