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共轉染是將一種以上類型的核酸引入真核細胞的過程。組合的一些例子包括多個質粒DNA ,siRNA和質粒DNA ,以及多個miRNAs進入同一個細胞。通常,多質粒DNA共轉染的目的是將一種以上的外源基因導入宿主細胞。其應用之一是生產由幾種質粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個例子是在HEK293細胞系中,用轉移、包膜和包裝載體等幾種質粒載體生成慢病毒。此外,多個質粒DNA的共轉染也可以應用于蛋白質-蛋白質相互作用(PPI)研究,以研究一種蛋白質與另一種蛋白質之間的關系。為了在體外和體內可重復地傳遞基因和siRNA,含有核酸的脂質體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉染試劑。上海lipo3000轉染試劑
基于病毒的轉染,或者更具體地稱為轉導,涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。逆轉錄病毒,如慢病毒,通常用于穩(wěn)定轉染。相比之下,腺病毒、腺相關病毒(AAV)和皰疹病毒是不能保證穩(wěn)定轉染的病毒載體。與非病毒轉染相比,病毒轉導被***認為是一種轉染難以轉染的細胞(如原代細胞)的高效方法。一般來說,逆轉錄病毒只能用于轉染分裂細胞,而腺病毒、AAV和皰疹病毒可用于轉染分裂細胞和非分裂細胞。然而,病毒轉導與較高的細胞毒性相關,并可能造成病毒***的風險。病毒載體通常包含一個病毒包膜,它包圍并保護病毒。表面蛋白可能存在于某些類型的病毒(如腺病毒)的表面,以促進與宿主細胞的接觸和通信。病毒遺傳物質被包裹在衣殼中,進入宿主細胞后,衣殼將被打開。與腺病毒、aav和皰疹病毒的基因組不同,這些病毒的基因組是單獨維持的,逆轉錄病毒基因組被整合到宿主基因組中。通常,腺病毒和皰疹病毒攜帶雙鏈DNA, AAV攜帶單鏈DNA,而逆轉錄病毒攜帶RNA。鄭州轉染試劑定做PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質)制成的,是一個用作基因載體的聚酯。
轉染時通常推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基,包括陽離子轉染試劑,如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。這種轉染活動需要形成陽離子脂質體-DNA復合物,這需要帶正電的脂質體分子和帶負電的核酸之間的相互作用。因此,血清中負電荷分子的存在可能會影響這種復雜的相互作用,從而影響轉染效率。然而,發(fā)現(xiàn)10%血清的存在導致FuGENE HD、jetPEI、Lipofectamine 2000和Arrest-In轉染MCF-7、HeLa、C2C12和MC3T3的轉染效率更高。研究表明,轉染中少量的血清可以通過調節(jié)轉染復合物的zeta電位來改善轉染復合物與其宿主細胞表面之間的表面相互作用。
不同種類的納米顆粒轉染細胞系后,產生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測試表明,納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉染方法相當。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質體、陽離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉染劑對COS-1細胞系(非洲綠猴腎成纖維細胞樣細胞)使用四種不同的轉染介質所取得的轉染效果。固體脂質na-noparticles轉染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉染組的熒光素酶基因表達效率沒有統(tǒng)計學上的***差異,在每種轉染介質中保持相同水平。然而,獲得的轉染效率低于使用商業(yè)轉染劑EscortTM 的效率,該轉染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過在HepG2細胞(人肝細胞肝*細胞系)上使用固體脂質納米顆粒,實現(xiàn)了與市買的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達水平。在轉染中,DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質粒)轉運到宿主細胞中。
基因和RNAi***在臨床上的應用需要安全高效的載體。迄今為止,核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關的安全問題有很多:誘導免疫反應的風險、不必要的突變和**。因此,在開發(fā)基于脂質或聚合載體的非病毒載體是勢在必行的。1965年,Vaheri和Pagano引入了二乙基氨基乙基修飾的葡聚糖,這是第一種用于基因傳遞的聚合物。1987年,F(xiàn)elgner引入了DOTMA,這是第一種用于DNA轉染的陽離子脂質。從那時起,大量不同的脂質和聚合物被開發(fā)出來。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質體囊泡中的技術,開發(fā)出了Gemate系列轉染試劑。在選擇合適的小RNA分子進行轉染相關功能分析之前,應先確定其實驗需要。鄭州轉染試劑定做
基于病毒的轉染,或者更具體地稱為轉導,涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。上海lipo3000轉染試劑
隨著寡核苷酸生物合成產業(yè)的發(fā)展,不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場,以提高小RNA寡核苷酸轉染的效率。其中一種是通過化學修飾來提高其與靶標和阻斷外切酶活性的結合親和力的agomirs和antagomirs。agomir是一種人工修飾的雙鏈miRNA模擬物,旨在發(fā)揮比傳統(tǒng)miRNA模擬物更高的靶標抑制活性(krtzfeldt另一方面,antagomir是一種專門設計的單鏈miRNA類似物,旨在抑制特定的miRNA。agomir和antagomir都被認為更穩(wěn)定、更有效、更特異,而且與正常的模擬物或拮抗劑相比,對宿主細胞膜具有更高的結合親和力。鎖定核酸(LNA)是另一種修飾的寡核苷酸,其至少一個核苷酸具有額外的亞甲基橋,以增強其核糖環(huán)結構的穩(wěn)定性。其鎖定的核糖結構使得LNA比常用的寡核苷酸更短,從而使其比傳統(tǒng)的寡核苷酸表現(xiàn)出更高的效率、穩(wěn)定性和結合親和力。NA基寡核苷酸的應用已被報道用于各種生化或功能分析,涉及遞送小RNA分子,如siRNA、miRNA和piRNA。一些基于NA基的轉染不需要轉染試劑,這可以比較大限度地減少轉染過程中試劑的二次效應。上海lipo3000轉染試劑