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其他細胞結(jié)構(gòu)常用染料生物染料在細胞結(jié)構(gòu)和組分鑒定中有著廣泛的應(yīng)用,除細胞膜研究外,我們經(jīng)常也會對一些其它細胞結(jié)構(gòu)及成分進行探索,例如線粒體、溶酶體、蛋白質(zhì)、細胞核等,而對于不同的細胞結(jié)構(gòu)有不同的染料進行染色細胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液(DAPIStainingSolution)常用于細胞核染色,可將細胞核染成藍色。鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是細胞骨架的染色神器,羅丹明標記的Phalloidin(TRITC-Phalloidin)可將細胞染成橙紅色,DAPI與Phalloidin染色液是研究細胞形態(tài)變化時經(jīng)常用到的兩種共染的試劑,染色效果可見A1-E1用TRITC-鬼筆環(huán)肽(橙紅)染色的細胞骨架免疫熒光圖;A2-E2用DAPI(藍色)染色的細胞核免疫熒光圖;A3-E3合并的L929細胞免疫熒光染色圖。是S100A16過表達或下調(diào)前后PDAC細胞形態(tài)的變化。DiI(橙色熒光),DiO(綠色熒光),DiD(紅色熒光)和 DiR (深紅色熒光)對活細胞進行多色成像和流式分析。組織熒光染料細胞膜
SUPERGreenI(10,000×DMSO溶液,電泳級)儲存條件及注意事項4℃避光可保存12個月。本品用DMSO溶解,因DMSO的熔點是18.5℃,使用前請放置到室溫充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特點●無毒性:屬花菁類染料,容易生物降解,無致*毒性。●靈敏度高:至少可檢出20pgDNA,高于EB染色法25~100倍?!裥旁氡雀撸簶悠窡晒庑盘枏姡尘靶盘柕??!癫僮骱唵危簾o須脫色或沖洗,即可直接用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀察?!襁m用范圍廣:可適用于多種凝膠電泳方法:瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠電泳、脈沖電場凝膠電泳和毛細管電泳等。●使用方便:對分子生物學(xué)中常用的酶(如:Taq酶、反轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等)沒有抑制作用?!窠?jīng)濟:價格比銀染便宜。湖北納米熒光染料熒光素衍生物具有高吸收率優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性是流式細胞儀和免疫熒光中常用的熒光標記之一。
FITC熒光標記蛋白的應(yīng)用及特點:活性熒光染料,如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、羅丹明B(RhodamineB)或AlexaFluor染料,可用于標記抗體或蛋白質(zhì)功能基團,生成分子探針,并通過熒光成像進行檢測。當(dāng)用熒光染料化學(xué)標記特異性抗體或其他純化生物分子時,它們成為用于檢測靶抗原或相互作用配偶體的熒光探針,用于細胞成像、流式細胞手術(shù)、蛋白質(zhì)痕跡和酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)。由于熒光標記物具有無放射物污染、操作簡單等優(yōu)點,在蛋白質(zhì)功能研究、藥物篩選等許多研究領(lǐng)域得到了越來越廣泛的應(yīng)用。
南京星葉生物科技有限公司Super Fluor 系列(效果同Alexa Fluor系列)
且Super Fluor活化酯(與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同)
異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,F(xiàn)ITC):FITC是應(yīng)用*為***的一種熒光素,經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光,*大發(fā)射波長為525nm。FITC的熒光強度受PH影響較大,常隨著PH的降低而減弱,因此,在使用FITC時需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質(zhì)檢測(b)蛋白質(zhì)和肽的微測序分析(c)使用毛細管區(qū)帶電泳進行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(e)細胞和組織切片中的抗原檢測(f)通過標記DNA片段進行細胞凋亡檢測除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯(lián)物制備外,異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光(由于偶聯(lián)后的大消光系數(shù)和高量子產(chǎn)率),使其成為許多工藝的優(yōu)先染料。在流式細胞術(shù)和免疫熒光顯微術(shù)中,染料與各種抗體(一抗或二抗)結(jié)合,以檢查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在腎功能中的作用等狀態(tài)。作為熒光素的衍生物,異硫氰酸熒光素含有一個異硫氰酸酯反應(yīng)基團,這有助于其對通常存在于生物分子中的動漫和巰基基團具有反應(yīng)性。非磺化花青類染料- 該組中的一些染料包括 cy3、cy3.3、cy5、cy5.5、cy7 和 cy7.5。
1.DiD,DiO,DiI,DiR和DiS細胞膜染色液制備(1)配置DMSO或EtOH儲存液:儲存液用DMSO或EtOH配置濃度1~5mM。注意:未使用的儲存液保存在-20°C,避免反復(fù)凍融。(2)工作液制備:用合適的緩沖液(如:無血清培養(yǎng)基,HBSS或PBS)稀釋儲存液,配制濃度為1~5μM的工作液。注意:工作液的**終濃度是根據(jù)不同細胞和實驗的經(jīng)驗來配制??梢詮耐扑]濃度的十倍以上尋找比較好條件。
2.懸浮細胞染色(1)懸浮細胞密度為1×106/mL加入到工作液中。(2)在37℃培養(yǎng)細胞2~20分鐘,不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同。(3)染色細胞試管在1000~1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。(4)傾倒上清液,再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。(5)重復(fù)(3),(4)步驟兩次以上。 熒光染料可以單獨使用,也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。中國香港熒光染料紅色
與花青和羅丹明染料一樣,熒光素也是一種有機染料。組織熒光染料細胞膜
常用抗體標記熒光染料的特性及其應(yīng)用
1、FITC:激發(fā)波長488nm,比較大發(fā)射波長525nm。1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細胞儀;2)在流式細胞儀的FL1通道檢測;3)可用于熒光顯微鏡技術(shù)4)熒光強度易受PH值影響,PH值降低時其熒光強度減弱。2、AlexaFluor488:激發(fā)波長488nm,比較大發(fā)射波長519nm。1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細胞儀:2)在流式細胞儀的FL1通道檢測;3)具有超乎尋常的光穩(wěn)定性,非常適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)在較寬的PH值范圍內(nèi)保持穩(wěn)定(PH4~10)。5)南京星葉生物科技有限公司SuperFluor系列(效果同AlexaFluor系列)質(zhì)優(yōu)價廉,歡迎咨詢。3、Cy3:激發(fā)波長488nm,比較大發(fā)射波長570nm。1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細胞儀;2)在流式細胞儀的FL2通道檢測:3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)為小分子染料,非常適合需小分子染料的流式細胞術(shù),熒光強度低于PE。 組織熒光染料細胞膜