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標記的多樣化與多功能酶標儀應運而生 標記物的多樣化,是免疫技術(shù)的發(fā)展和進步的一個方面。免疫檢測標記物由本初的放射同位素,發(fā)展為安全無污染的辣根過氧化物酶(HRP)和磷酸酯酶,并進一步擴展到熒光素、稀土元素(目前主要是Eu)、上轉(zhuǎn)換等;底物溶液也對應的由酶催化下產(chǎn)生顏色效應的底物發(fā)展為產(chǎn)生光子或熒光信號,獲得更加靈敏和穩(wěn)定的信號和更寬的線性范圍,并相應產(chǎn)生了更多檢測模式。 多種檢測模式整合在單臺儀器上,多功能酶標儀就運用而生了,可實現(xiàn)對吸光度、時間分辨熒光(TRF)、化學發(fā)光(Lum)及非標記檢測技術(shù)熒光偏振(FP) 、熒光強度(FI,F(xiàn)RET)等兩種或多種模式的檢測。此外,應用于分子互作的BRET/NANO-BIT(生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù))、熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)(TR-FRET)和ALPHA等,近些年也被應用于多功能酶標儀中。而且多功能酶標儀不限于微孔板檢測,還可內(nèi)置比色皿插槽。因此,酶標儀目前已成為一個廣義的定義。在清洗酶標板時,要輕輕擦拭每個孔位,避免用力過猛導致孔口變形或損壞。江西本地酶標儀供應商
操作注意事項 酶標儀的功能是用來讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應結(jié)果,因此要得到準確結(jié)果,試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標儀之前是通過目測判斷結(jié)果,操作過程隨意性較大,在使用酶標儀后如果不能及時糾正操作習慣,會造成較大誤差。在酶標儀的操作中應注意以下事項: 1.使用加液器加液,加液頭不能混用。 2.洗板要洗干凈。如果條件允許,使用洗板機洗板,避免交叉污染。 3.嚴格按照試劑盒的說明書操作,反應時間準確。 4.在測量過程中,請勿碰酶標板,以防酶標板傳送時擠傷操作人員的手。 5.請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,操作完成后請洗手。 6.如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學危害,請嚴格按照試劑盒的操作說明,以防對操作人員造成損害。 7.如果儀器接觸過污染性或傳染性物品,請進行清洗和消毒。 8.不要在測量過程中關(guān)閉電源。 9.對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差,應根據(jù)實際情況及時修改參數(shù),以達到較好效果。 10.使用后蓋好防塵罩。 11.出現(xiàn)技術(shù)故障時應及時與廠家聯(lián)系,切勿擅自拆卸酶標儀上海實驗室酶標儀怎么用酶標儀可應用于實驗室診斷,動植物檢驗檢疫機構(gòu),畜牧局,生物技術(shù)研究單位等。
酶標儀的分類 3.化學發(fā)光酶標儀:是來自生物化學反應中的自發(fā)光,可分為輝光型和閃光型兩種類型,輝光型發(fā)光持久,穩(wěn)定,能持續(xù)一段時間;閃光型發(fā)光時間短,變化快,穩(wěn)定性不強,需要應用自動加樣器才可以進行,化學發(fā)光中發(fā)出的光子數(shù)與樣品量呈一定比例關(guān)系,化學發(fā)光酶標儀靈敏度非常高,動力學范圍廣, 4.多功能酶標儀:是以上三種酶標儀的整合,它集成了兩種或者三種酶標儀于一體,可以同時進行光吸收,熒光和化學發(fā)光的檢測,功能強大,使用范圍廣,可作為研究平臺,避免了重復購買,是實驗室的優(yōu)異之選,另外根據(jù)通道的個數(shù),可以將酶標儀分為單通道和多通道兩種類型,單通道又有自動和手動兩種之分。
酶標儀基本原理和特點 酶標儀是一種單通道自動進樣的酶標儀工作原理圖。光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光,進入塑料微孔極中的待測標本,該單色光一部分被標本吸收,另一部分則透過標本照射到光電檢測器上。光電檢測器將透射過待測標本后強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應的電信號,電信號經(jīng)前置放大、對數(shù)放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換等處理后,送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理,轉(zhuǎn)換成相應的濃度,較后由顯示器和打印機輸出結(jié)果。酶標儀的基本原理: 使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質(zhì)分開,較后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可較大地放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。光吸收酶標儀是對可見或紫外吸光度的檢測,即檢測被樣品吸收掉的光密度。
檢測步驟 1.取固體或液體樣品5ml,加入25ml 70%的甲醇,混勻3分鐘,靜止10分鐘,過濾,收集濾液,吸取100ul濾液加100ul分析緩沖液,混勻。 2.取出綠色的稀釋孔和無色的有抗體包被的稀釋孔各放入一個板架上。 3.吸取200ul酶聯(lián)偶合物加入到綠色的稀釋孔,再吸取100ul標樣(0、2、5、20、50ppb),和100ul步驟1的待檢混合樣,混勻3次。 4.然后從300ul混合物中吸取100ul加入到無色的有抗體包被的稀釋孔中,靜止15分鐘。 5.將孔中的液體倒掉,用蒸餾水沖洗每個孔,將微孔倒置于紙巾上把水吸干。 6. 加入100ul底物,放置5分鐘,顏色變?yōu)樗{色。 7. 加入100ul終止液,顏色變?yōu)辄S色。 8. 上機檢測,(酶標儀濾鏡450nm,示差濾鏡630nm) 9. 稀釋倍數(shù)f:1 10. 定量限:生奶0.002ug/kg, 11. 牛奶或花生醬≤20ug/kg,合格, 12. 計算公式:X= c*f單功能酶標儀主要包括光吸收酶標儀、熒光酶標儀、化學發(fā)光酶標儀等。浙江智能酶標儀貨源充足
酶標儀兼容微量檢測板:可進行體積為2μL或4μL,較大可支持60多個微量樣品的同時檢測。江西本地酶標儀供應商
酶標儀的發(fā)展歷程 酶標儀的前世今生 1966年,美國的Nakane和Pierce及法國的Avrameas和Uriel同時報道了以新的標記物——辣根過氧化酶(HRP)替代熒光素,定位組織中抗原的酶免疫組織化學技術(shù)(EIH)。1971年,Engvall和Perlmann在酶免疫組織化學的基礎(chǔ)上,又發(fā)展出一種酶標固相免疫測定技術(shù),即酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),成為繼放射免疫分析技術(shù)、熒光免疫之后的第三大標記免疫分析技術(shù)。70年代中期,隨著雜交瘤技術(shù)的發(fā)展,發(fā)明了單克隆抗體制備技術(shù),將其應用于酶免疫測定中,提高了其靈敏度和特異性,使一步法雙抗體夾心法等酶免疫測定方法相繼出現(xiàn)。 酶免疫分析技術(shù)是將酶催化的放大作用與抗原、抗體特異性反應相結(jié)合的一種微量分析技術(shù)。酶標記抗體或抗原后,既不影響抗體或抗原的免疫反應特異性,也不改變酶本身的催化活性,在相應的反應底物參與下,標記的酶水解底物或顯色,或使供氫體由無色的還原型轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩难趸?,其有色產(chǎn)物可以通過肉眼、分光光度計或顯微鏡觀察或測定。江西本地酶標儀供應商