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從白血病KG1a細胞中分選CD34+CD38-干細胞并研究其生物學特性.方法免疫磁珠法分選CD34+CD38-細胞,流式細胞術(shù)分析細胞表面膜抗原,細胞周期,甲基纖維素培養(yǎng)體系觀察其克隆性;以HL60,K562,CD34+CD38+細胞為對照,甲基偶氮唑藍法檢測柔紅霉素對CD34+CD38-細胞的抑制作用;BALB/c裸鼠皮下接種,觀察體內(nèi)成瘤能力.結(jié)果分選的CD34+CD38-細胞純度達95%以上,(69.03±3.25)%處于G0期,克隆形成率為(38.64±2.68)%,明顯抵抗柔紅霉素;不同濃度柔紅霉素作用后,CD34+CD38-,CD34+CD38+,HL60,K562細胞的活性差異有統(tǒng)計學意義(F=961.136,P=0.000);CD34+CD38-在裸鼠皮下成瘤率***高于CD34+CD38+細胞(P〈0.05).結(jié)論免疫磁珠法分選白血病干細胞簡單易行,分選的細胞符合白血病干細胞生物學特性.多聚抗原肽免疫磁珠在制備單表位抗體中的應(yīng)用。廣東anti-Flag COIP免疫磁珠批量定制
免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤干細胞的方法.方法將術(shù)中取得的腦膠質(zhì)瘤標本,通過剪切,消化和吹打成單細胞懸液,篩網(wǎng)過濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133^+細胞,用神經(jīng)干細胞無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細胞克隆能力的細胞球,取第3代進行誘導分化,分化前后用免疫細胞熒光化學方法鑒定**干細胞及分化后細胞.結(jié)果免疫磁珠分選出的CD133^+細胞,可懸浮生長并形成神經(jīng)干細胞樣細胞球,有較強的增殖能力,干細胞標志物巢蛋白(nestin)陽性,分化后細胞表達神經(jīng)元小管相關(guān)蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質(zhì)細胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白,CD133^+陰性,并具有**的核型.結(jié)論免疫磁珠分選法可避免原代培養(yǎng)中眾多細胞混雜生長的發(fā)生,能夠從大量腫瘤細胞中分離出只占極少比例的**干細胞,細胞結(jié)合磁珠后在體外可以長期培養(yǎng)和傳代,進一步證實了**干細胞的存在,并為膠質(zhì)瘤干細胞的研究奠定基礎(chǔ).遼寧anti-Flag COIP免疫磁珠銷售免疫磁珠純化人呼吸道合胞病毒F蛋白方法的建立。
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在agarosebeads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白,那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離,對B蛋白進行檢測,進而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的,符合體內(nèi)實際情況,得到的結(jié)果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
用多聚抗原肽(multipleantigenpeptides,MAP)包被磁珠制備單表位抗體的方法.方法:通過Fmoc法固相化學合成UreB的8分支單表位MAP,將其作為免疫原免疫小鼠,獲得多克隆抗血清.將MAP以共價偶聯(lián)的方式包被磁珠制備免疫磁珠(immunomagneticbeads,IB),通過IB從多克隆抗血清中純化單表位抗體,熒光偏振(fluorescencepolarization,FP)法鑒定抗體的特異性,SDS-PAGE鑒定抗體純度,紫外分光光度法測定其回收率.結(jié)果:合成的MAP具有較強的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗體滴度高達1∶12800.MAP制備免疫磁珠的比較好包被濃度為100mg/L,包被效率比較高可達79%.應(yīng)用MAP免疫磁珠從抗血清中純化得到的單表位抗體,經(jīng)鑒定與其他抗原表位無反應(yīng)性,其純度為95%,抗體的回收率為5.8%.結(jié)論:MAP包被的磁珠可快速分離純化出針對某一抗原表位的特異性抗體,其性質(zhì)類似單克隆抗體.這一方案在快速制備少量高特異性抗體中具有廣闊的應(yīng)用前景.免疫磁珠的制備及其富集,分離單增李斯特菌的研究。
BEENbio鏈霉親和素磁珠本產(chǎn)品是由磁性納米顆粒與高純度的鏈霉親和素共價偶聯(lián)而成。這種微球能用于捕獲生物素標記的底物,如抗原、抗體和核酸等。鏈霉親和素(streptavidin)與生物素(biotin)的結(jié)合是***的非共價生物交互作用之一,因此,這也是親和層析法所使用的一種強大工具。生物分子可以與生物素輕松融合,而層析基質(zhì)上固定的鏈霉親和素配體可以與之結(jié)合,而且這種鏈霉親和素-生物素相互作用具有較低的非特異親和性,捕獲所需的底物能夠直接應(yīng)用于后續(xù)實驗。本產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用于免疫學檢測、核酸純化、核酸固相雜交檢測、細胞分選等分子生物學實驗。免疫磁珠技術(shù)在tumor學中的應(yīng)用。河南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠代理價格4折起
基于免疫磁珠分散聚集狀態(tài)檢測病原體與Cancer癥標志物。廣東anti-Flag COIP免疫磁珠批量定制
COIP常見問題及對策
1:如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?
磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關(guān),請確 認抗體的類型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低,可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間( 30~120min)、提高結(jié)合緩沖液的pH值(8~9)及降低離子強度( 25~100mM NaCl)等方法提高親和效率。
2:如何提高磁珠在免疫沉淀反應(yīng)中的特異性?
可以先將抗體與樣品進行孵育,形成抗體-抗原復合物,再用 Protein A/G磁珠捕獲復合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結(jié)合效 率,并降低磁珠與樣品接觸的時間,從而提高沉淀產(chǎn)物的特異性。對 于蛋白質(zhì)/核酸共沉淀或染色質(zhì)免疫共沉淀也推薦使用此法。 廣東anti-Flag COIP免疫磁珠批量定制
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