利用免疫磁珠從SD大鼠坐骨神經分離培養(yǎng)獲得大量,高純度雪旺細胞的方法.[方法]選用4-7dSD大鼠,無菌條件下取雙側坐骨神經,解剖鏡下剝離去除神經外膜,獲得神經束,將神經束剪碎至1mm3大小.采用雙酶2次消化法消化,胎牛血清中止消化后,離心并加入DF12培養(yǎng)液培養(yǎng).7d后應用免疫磁珠法對細胞進行純化培養(yǎng),培養(yǎng)2d后進行傳代接種.培養(yǎng)過程中對細胞進行形態(tài)學觀察,計數及活力測定;MTY法繪制細胞生長曲線,采用免疫細胞化學熒光染色對細胞進行鑒定并且計算所得細胞純度.[結果]分離培養(yǎng)所得細胞即為雪旺細胞;采用免疫磁珠法能對培養(yǎng)所得雪旺細胞進行純化.純化后雪旺細胞活力為96%±0.5%,純度98%±1.1%,培養(yǎng)2d后就可以傳代.[結論]免疫磁珠法可以用于雪旺細胞的純化培養(yǎng),所得雪旺細胞純度高,活力強,能滿足組織工程人工神經的需要.免疫磁珠陰性法富集惡性胸腔積液中腫瘤細胞方法的建立。甘肅protein A/G COIP免疫磁珠生產廠家
免疫磁性細胞分選系統(tǒng)分離純化骨髓衍生肝干細胞亞群c-Kit^+lin^-。方法:實驗于2006—07/08在南方醫(yī)科大學實驗動物中心完成。6~8周齡的SPF級純系BALB,C雄性小鼠10只,體質量18~20g。收集小鼠股骨骨髓細胞,利用免疫磁性細胞分選系統(tǒng),通過兩步法分選純化c-Kit^+lin^-:將獲取的lin^-細胞懸液8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按80μL/10^7加入Buffer重懸細胞。按20μL/10^7加生物素抗體磁珠,混勻,4℃冰箱孵育15min,按1 mL/10^7加入Buffer洗細胞1次,8℃條件下1500r/min離心10min,棄上清,按500μL/10^8加入Buffer重懸細胞。Buffer 500μL潤MS柱,懸液過柱后,Buffer 500μL/次洗柱3次,柱子脫離磁場,加1mL Buffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit^+lin^-細胞,收集到c-kit^+lin-細胞,細胞計數。取2.0x108個細胞分成10等份,流式細胞儀分析c-Kit^+lin^-細胞純度,計算回收率,評估純化效率,苔盼蘭染色檢測純化前后的細胞活力。計算活細胞的百分率。細胞純度和細胞回收率的計算:細胞純度:分離產物中的陽性細胞數,分離細胞的總細胞數×100%,細胞回收率:分離產物中的陽性細胞數,起始標本陽性細胞總數×100%。河南蛋白質免疫共沉淀免疫磁珠供應商免疫磁珠技術應用于肺Cancer中的研究進展。
免疫磁珠法分選人骨髓多能成體祖細胞,觀察其分選效果,建立體外分選純化及培養(yǎng)人骨髓來源多能成體祖細胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者適量骨髓后采用梯度密度離心法分離獲取單個核細胞,在自制培養(yǎng)基下貼壁培養(yǎng)后,將獲取的骨髓貼壁細胞通過CD45,血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)負分選,錐蟲藍拒染實驗計數MACS分選前后細胞活力.流式細胞儀鑒定分選后細胞純度;流式細胞儀分析培養(yǎng)細胞CD29,CD44,CD34和HLA-DR表達情況.結果:通過MACS分選,平均每1×106/ml骨髓貼壁細胞可分選出約(5~10)×104/mlhMAPCs,分選后的hMAPCs細胞生長良好,**長傳代到第20代.分選前后細胞活力分別為(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,無明顯差異;流式細胞儀分析獲取的CD45-,GlyA-細胞純度大于98%;流式細胞儀檢測hMAPCs中CD29陽性表達細胞比率為99.2%,CD44陽性細胞比率為98.3%,CD34陽性細胞比率為1.2%,HLA-DR陽性細胞比率為5.3%.結論:CD45,GlyA免疫微磁珠負分選可從骨髓中分離高純度的hMAPCs;分選后hMAPCs在自行研制的培養(yǎng)基中有較強的增殖能力.
用多聚抗原肽(multipleantigenpeptides,MAP)包被磁珠制備單表位抗體的方法.方法:通過Fmoc法固相化學合成UreB的8分支單表位MAP,將其作為免疫原免疫小鼠,獲得多克隆抗血清.將MAP以共價偶聯的方式包被磁珠制備免疫磁珠(immunomagneticbeads,IB),通過IB從多克隆抗血清中純化單表位抗體,熒光偏振(fluorescencepolarization,FP)法鑒定抗體的特異性,SDS-PAGE鑒定抗體純度,紫外分光光度法測定其回收率.結果:合成的MAP具有較強的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗體滴度高達1∶12800.MAP制備免疫磁珠的比較好包被濃度為100mg/L,包被效率比較高可達79%.應用MAP免疫磁珠從抗血清中純化得到的單表位抗體,經鑒定與其他抗原表位無反應性,其純度為95%,抗體的回收率為5.8%.結論:MAP包被的磁珠可快速分離純化出針對某一抗原表位的特異性抗體,其性質類似單克隆抗體.這一方案在快速制備少量高特異性抗體中具有廣闊的應用前景.免疫磁珠法分離成人骨髓來源神經干細胞的生物學特征。
從白血病KG1a細胞中分選CD34+CD38-干細胞并研究其生物學特性.方法免疫磁珠法分選CD34+CD38-細胞,流式細胞術分析細胞表面膜抗原,細胞周期,甲基纖維素培養(yǎng)體系觀察其克隆性;以HL60,K562,CD34+CD38+細胞為對照,甲基偶氮唑藍法檢測柔紅霉素對CD34+CD38-細胞的抑制作用;BALB/c裸鼠皮下接種,觀察體內成瘤能力.結果分選的CD34+CD38-細胞純度達95%以上,(69.03±3.25)%處于G0期,克隆形成率為(38.64±2.68)%,明顯抵抗柔紅霉素;不同濃度柔紅霉素作用后,CD34+CD38-,CD34+CD38+,HL60,K562細胞的活性差異有統(tǒng)計學意義(F=961.136,P=0.000);CD34+CD38-在裸鼠皮下成瘤率***高于CD34+CD38+細胞(P〈0.05).結論免疫磁珠法分選白血病干細胞簡單易行,分選的細胞符合白血病干細胞生物學特性.免疫磁珠技術檢測外周血中卵巢Cancer細胞。甘肅anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠銷售
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檢測EPCAM、MUC16兩種抗原在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細胞中表達的相關性。方法分別用羧基磁珠制備EPCAM、MUC16兩種免疫磁珠,分3組:EPCAM免疫磁珠檢測組、MUC16免疫磁珠檢測組、2種磁珠均等混合檢測組。對來源于同一患者的等體積外周血樣本進行循環(huán)腫瘤細胞檢測,HE染色后鑒定檢測值。結果EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+MUC16免疫磁珠對同體積、同來源樣本檢測值分別為22±11、14±6、28±12個腫瘤細胞(P0.05),說明檢測效率有統(tǒng)計學差異。結論MUC16與EPCAM在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細胞中**表達且存在差異,因此增加MUC16這一***標志物可有效提高上皮性卵巢*CTCs檢出數量。甘肅protein A/G COIP免疫磁珠生產廠家
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