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利用免疫磁珠從SD大鼠坐骨神經(jīng)分離培養(yǎng)獲得大量,高純度雪旺細(xì)胞的方法.[方法]選用4-7dSD大鼠,無菌條件下取雙側(cè)坐骨神經(jīng),解剖鏡下剝離去除神經(jīng)外膜,獲得神經(jīng)束,將神經(jīng)束剪碎至1mm3大小.采用雙酶2次消化法消化,胎牛血清中止消化后,離心并加入DF12培養(yǎng)液培養(yǎng).7d后應(yīng)用免疫磁珠法對細(xì)胞進(jìn)行純化培養(yǎng),培養(yǎng)2d后進(jìn)行傳代接種.培養(yǎng)過程中對細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,計(jì)數(shù)及活力測定;MTY法繪制細(xì)胞生長曲線,采用免疫細(xì)胞化學(xué)熒光染色對細(xì)胞進(jìn)行鑒定并且計(jì)算所得細(xì)胞純度.[結(jié)果]分離培養(yǎng)所得細(xì)胞即為雪旺細(xì)胞;采用免疫磁珠法能對培養(yǎng)所得雪旺細(xì)胞進(jìn)行純化.純化后雪旺細(xì)胞活力為96%±0.5%,純度98%±1.1%,培養(yǎng)2d后就可以傳代.[結(jié)論]免疫磁珠法可以用于雪旺細(xì)胞的純化培養(yǎng),所得雪旺細(xì)胞純度高,活力強(qiáng),能滿足組織工程人工神經(jīng)的需要.空腸彎曲菌免疫磁珠富集方法的建立。江蘇anti-HA COIP免疫磁珠經(jīng)銷商價(jià)格4折起
免疫磁珠細(xì)胞分選方法可以在幾分鐘內(nèi)從復(fù)雜的細(xì)胞混合物中分離出很高純度的細(xì)胞。把細(xì)胞用超級順磁性的免疫磁珠特異性地標(biāo)記,磁性標(biāo)記完后,把這些細(xì)胞通過一個放在強(qiáng)而穩(wěn)定磁場中的分選柱。分選柱里的基質(zhì)造成一個高梯度磁場。被磁性標(biāo)記的細(xì)胞滯留在柱里而未被標(biāo)記的細(xì)胞則流出。當(dāng)分選柱移出磁場后,滯留柱內(nèi)的磁性標(biāo)記細(xì)胞就可以被洗脫出來,這樣就完全可以獲得標(biāo)記和未標(biāo)記的兩個細(xì)胞組份。超順磁性的磁珠的體積很小,其直徑約為50nm,體積約小于真核細(xì)胞的一百萬份之一,可與病毒的大小相比。標(biāo)記細(xì)胞上的微型磁珠即使在掃描電鏡照片上也幾乎看不到。磁性抗體和磁性標(biāo)記物間的反應(yīng)可在幾分鐘內(nèi)完成。由于微型磁珠的體積極小,所以不會對細(xì)胞造成機(jī)械性壓力,而且使孵育時(shí)間短,操作過程快。免疫磁珠形成一個穩(wěn)定的膠體液,它們在磁場中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大小和它的組成成份(氧化鐵和多糖)使其可被生物降解,且不會***細(xì)胞或影響細(xì)胞的功能和活力,細(xì)胞的生理功能也不變。磁珠不需要去除,因此,陽性分選出的細(xì)胞(即磁性標(biāo)記細(xì)胞)可立即用于分析和隨后的實(shí)驗(yàn)。黑龍江anti-HA COIP免疫磁珠經(jīng)銷商價(jià)格4折起免疫磁珠法分離成人骨髓來源神經(jīng)干細(xì)胞的生物學(xué)特征。
免疫磁珠法(MACS):免疫磁珠法是2O世紀(jì)80年代出現(xiàn)的技術(shù)方法。1983年Ugelstad提出將免疫磁珠用于細(xì)胞分選,1990年,Mihenyi建立了MACS。這一方法的**是在磁珠表面包被具免疫反應(yīng)性的抗體進(jìn)行抗原抗體反應(yīng),在細(xì)胞表面形成玫瑰花結(jié),這些結(jié)合了磁珠的細(xì)胞一旦置于強(qiáng)大的磁場下,就會與其他未被結(jié)合的細(xì)胞分群,具***順磁場的磁珠脫離磁場后立即消失磁性,這樣就可以篩選或去除所標(biāo)記的細(xì)胞,從而達(dá)到陽性或陰性選擇細(xì)胞的目的。這一技術(shù)已經(jīng)***運(yùn)用于細(xì)胞及分子生物學(xué),分離基因、靶細(xì)胞及造血干細(xì)胞等。其分離效果得到了免疫熒光、PCR、FISH及FACS等方法的確認(rèn)。免疫磁珠可以有效地分選細(xì)胞,從而決定了這一方法在神經(jīng)干細(xì)胞分選中應(yīng)用的技術(shù)可行性。
兔前軟骨干細(xì)胞PSCs,(precartilagiousstemcells)的分離,培養(yǎng)方法及增殖,表型特征,為細(xì)胞移植***椎間盤退變,提供合適的種子細(xì)胞.[方法]取胎兔骨骺周圍軟骨膜(LaCroix環(huán))中的細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),然后采用免疫磁珠分離系統(tǒng)分選純化PSCs.體外培養(yǎng),傳代,凍存復(fù)蘇,繪制生長曲線,觀察細(xì)胞特性.分別采用免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定純化后的PSCs.[結(jié)果]免疫磁珠分離可獲得純度較高的兔PSCs,培養(yǎng)后成活率高,細(xì)胞狀態(tài)良好.細(xì)胞凍存復(fù)蘇后,細(xì)胞增殖速度,細(xì)胞形態(tài)及表面標(biāo)志物無明顯變化.免疫組化,免疫熒光,RT-PCR等方法鑒定后,細(xì)胞都有明顯的PSCs表面特異性標(biāo)記物的表達(dá).[結(jié)論]PSCs存在于LaCroix環(huán)中,免疫磁珠分離法得到的PSCs,體外培養(yǎng)條件下,細(xì)胞增殖較快,生物學(xué)特性穩(wěn)定.免疫磁珠法分離和純化胚胎神經(jīng)干細(xì)胞。
免疫磁珠分離法純化抗血清的實(shí)驗(yàn)條件,并與A蛋白親和層析法比較純化效果,以求得到一種簡便,快速,高效的純化IgG方法.結(jié)果表明:從5只新西蘭兔獲得210 mL試管凝集效價(jià)高達(dá)1:5 120的兔抗鰻弧菌抗血清,磁珠與IgG結(jié)合10 min達(dá)到平衡,其比較大結(jié)合量為0.227 mg/mL;免疫磁珠分離法與A蛋白親和層析法得到的IgG純度都很高,經(jīng)過SDS-PAGE電泳都只得到25 ku和55 ku左右的兩條帶;免疫磁珠分離法得到的抗體ELISA效價(jià)高于A蛋白親和層析法;免疫磁珠分離法反應(yīng)所需時(shí)間(10 min)小于A蛋白親和層析法所需的20 min,其得率(11.5 mg/mL)也高于A蛋白親和層析法的10.25 mg/mL.免疫磁珠富集與免疫層析一體化檢測甲型流感病毒的研究。陜西anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠市場報(bào)價(jià)
BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠蛋白相互作用。江蘇anti-HA COIP免疫磁珠經(jīng)銷商價(jià)格4折起
產(chǎn)品價(jià)格
產(chǎn)品貨號
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規(guī)格
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價(jià)格
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BEENbio-PR003-0.4
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0.4 mL
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1150 RMB
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BEENbio-PR003-1
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1 mL
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1780 RMB
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BEENbio-PR003-5
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5 mL
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6825 RMB
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產(chǎn)品描述
BEENbio Anti HA COIP磁珠在大小為2um的納米磁珠上供價(jià)結(jié)合了大量的小鼠Anti HA單克隆抗體,與傳統(tǒng)的Anti HA COIP瓊脂糖凝膠比較,抗體結(jié)合能力相同,背景更低,由于采用磁性分離,使得每次COIP可以節(jié)省40%的時(shí)間。
產(chǎn)品特性
項(xiàng)目
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特性
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抗體亞型
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鼠源IgG1
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抗體純化方法
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Protein A 純化制備
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適用范圍
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免疫共沉淀(IP),HA tag蛋白純化
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推薦使用體積
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COIP: 500μl 細(xì)胞裂解液 使用 10μL磁珠
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融合蛋白結(jié)合容量
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大于1.1 mg HA tagged protein/mL 磁珠
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儲存條件
4oC長期穩(wěn)定
使用說明
磁珠的準(zhǔn)備
重懸Anti HA 免疫磁珠,取10 μL加入到500 μL TBS,洗滌3次,分離磁珠,棄上清。
樣品的結(jié)合(binding)
在上述沉淀中加入500 μL細(xì)胞裂解液,室溫緩慢孵育2小時(shí)或者4°C條件下過夜,分離磁珠,棄上清。
注意:結(jié)合過程中,磁珠可能會出現(xiàn)聚團(tuán)或呈片狀,屬于正?,F(xiàn)象,不會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
洗滌(washing):0.5 mL TBS緩沖液洗滌四次,每次5min,分離磁珠,棄上清。
洗脫(elution):上述所得沉淀中加 入50 μL 1×蛋白上樣緩沖液,煮沸5 min,冷卻后分離磁珠,吸取上清液,進(jìn)行SDS-PAGE檢測。 江蘇anti-HA COIP免疫磁珠經(jīng)銷商價(jià)格4折起
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