COIP常見問(wèn)題及對(duì)策

1：如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?

磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來(lái)源及所屬亞型有關(guān)，請(qǐng)確 認(rèn)抗體的類型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低，可以通過(guò)增加抗體與磁珠的孵育時(shí)間（ 30～120min）、提高結(jié)合緩沖液的pH值（8～9）及降低離子強(qiáng)度（ 25～100mM NaCl）等方法提高親和效率。

2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應(yīng)中的特異性?

可以先將抗體與樣品進(jìn)行孵育，形成抗體-抗原復(fù)合物，再用 Protein A/G磁珠捕獲復(fù)合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結(jié)合效 率，并降低磁珠與樣品接觸的時(shí)間，從而提高沉淀產(chǎn)物的特異性。對(duì) 于蛋白質(zhì)/核酸共沉淀或染色質(zhì)免疫共沉淀也推薦使用此法。 納米免疫磁珠富集單核增生李斯特菌的研究。河南protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

利用免疫磁珠從SD大鼠坐骨神經(jīng)分離培養(yǎng)獲得大量,高純度雪旺細(xì)胞的方法.[方法]選用4-7dSD大鼠,無(wú)菌條件下取雙側(cè)坐骨神經(jīng),解剖鏡下剝離去除神經(jīng)外膜,獲得神經(jīng)束,將神經(jīng)束剪碎至1mm3大小.采用雙酶2次消化法消化,胎牛血清中止消化后,離心并加入DF12培養(yǎng)液培養(yǎng).7d后應(yīng)用免疫磁珠法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行純化培養(yǎng),培養(yǎng)2d后進(jìn)行傳代接種.培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,計(jì)數(shù)及活力測(cè)定;MTY法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,采用免疫細(xì)胞化學(xué)熒光染色對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定并且計(jì)算所得細(xì)胞純度.[結(jié)果]分離培養(yǎng)所得細(xì)胞即為雪旺細(xì)胞;采用免疫磁珠法能對(duì)培養(yǎng)所得雪旺細(xì)胞進(jìn)行純化.純化后雪旺細(xì)胞活力為96%±0.5%,純度98%±1.1%,培養(yǎng)2d后就可以傳代.[結(jié)論]免疫磁珠法可以用于雪旺細(xì)胞的純化培養(yǎng),所得雪旺細(xì)胞純度高,活力強(qiáng),能滿足組織工程人工神經(jīng)的需要.甘肅COIP免疫磁珠經(jīng)銷商價(jià)格4折起免疫磁珠技術(shù)應(yīng)用于肺Cancer中的研究進(jìn)展。

常用的磁珠法DNA提取試劑盒，國(guó)外的有Dynal、Qiagen等，國(guó)內(nèi)將磁珠應(yīng)用于核酸提取的研究起源于02年左右，經(jīng)過(guò)近些年的反復(fù)試驗(yàn)，形成了穩(wěn)定的核酸提取體系，并已被***用于一些疾?。ㄈ缫腋?、丙肝、結(jié)核菌）等的定量檢測(cè)（如惠爾納米的系列磁珠法核酸提取試劑盒）。國(guó)產(chǎn)磁珠法試劑盒與進(jìn)口產(chǎn)品相比，已不單單是只具有價(jià)格優(yōu)勢(shì)，其產(chǎn)品的穩(wěn)定性、高效性、提取出的核酸的質(zhì)量與產(chǎn)量都足以與進(jìn)口磁珠法試劑盒媲美。但是進(jìn)口試劑盒長(zhǎng)期以來(lái)形成的完善的銷售渠道對(duì)國(guó)產(chǎn)試劑盒的推廣是一大挑戰(zhàn)。

    免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽(yáng)性細(xì)胞,獲得同質(zhì)性骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.方法:實(shí)驗(yàn)于2004-06/2005-06在東南大學(xué)修復(fù)重建外科研究所實(shí)驗(yàn)室完成.采集正常自愿獻(xiàn)髓者骨髓,淋巴細(xì)胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細(xì)胞,研究其生長(zhǎng)曲線,體外擴(kuò)增能力,集落形成能力,細(xì)胞表型,細(xì)胞周期,成骨能力.結(jié)果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細(xì)胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),相差顯微鏡下STRO-1^+細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞梭形外觀.②生長(zhǎng)曲線可分為細(xì)胞生長(zhǎng)延滯期,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期及穩(wěn)定期,細(xì)胞倍增時(shí)間為57h.③STRO-1^+細(xì)胞可以在體外擴(kuò)增12周左右,形成的成纖維細(xì)胞集落數(shù),處于細(xì)胞分裂期的細(xì)胞數(shù),擴(kuò)增倍數(shù)均低于傳統(tǒng)分離方法得到的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.④經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè),STRO-1^+細(xì)胞穩(wěn)定地表達(dá)CD29,CD44,CD105,不表達(dá)造血細(xì)胞系的表面標(biāo)記CD14,CD34,CD45,HLA-DR.⑤經(jīng)成骨培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞具有很強(qiáng)的成骨分化能力.結(jié)論:利用免疫磁珠能夠從成人骨髓中快速分離,純化骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,且具有高效,靈敏。BEENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。

常見問(wèn)題及對(duì)策

3： 如何避免磁珠在儲(chǔ)存或使用過(guò)程中可能出現(xiàn)的聚集情況？

磁珠應(yīng)保存在2～8℃，使用時(shí)應(yīng)避免由于污染而導(dǎo)致的不可逆聚 集，或因干燥而導(dǎo)致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發(fā)生聚集屬 于正?，F(xiàn)象，不影響磁珠的正常使用。在Binding buffer和Elution buffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、 Tween-20 或 Triton X-100）可有效防止磁珠聚集。經(jīng)過(guò)低pH洗脫操 作的磁珠可以用結(jié)合緩沖液洗滌至中性，然后用含有0.1% (v/v)Tween-20的Tris buffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠，并用超聲波水浴 處理2min，即可使磁珠恢復(fù)均勻狀態(tài)，以上處理均不影響磁珠的抗體 結(jié)合效率。

4： 如何解決磁珠易粘附管壁的現(xiàn)象？

建議使用低吸附率的耗材進(jìn)行磁珠操作。另外，在緩沖液中添加 0.01%～0.1%(v/v)的非離子型去垢劑（如NP-40、Tween-20或 Triton X-100）可以有效降低磁珠對(duì)耗材的粘附。

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免疫磁珠法分離成人骨髓來(lái)源神經(jīng)干細(xì)胞的生物學(xué)特征。河南protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

精原干細(xì)胞(spermatogonialstemcells,SSCs)富集純化是利用SSCs進(jìn)行基因修飾新方法等研究的前提基礎(chǔ)。采用免疫磁珠分選法,使用干細(xì)胞抗體CD90.2進(jìn)行小鼠SSCs的純化富集,并采用流式細(xì)胞分析法和定量PCR驗(yàn)證了磁珠分選效率。流式細(xì)胞分析結(jié)果:免疫磁珠分選后SSCs純度為50.11%。熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果:磁珠分選后支持細(xì)胞特異表達(dá)基因GATA4***下調(diào)(6倍)、SSCs表達(dá)基因GFRα-1上調(diào)(6.5倍)、生殖干細(xì)胞特異表達(dá)基因OCT4極***上調(diào)(5.9倍),3個(gè)基因相對(duì)表達(dá)量的變化說(shuō)明,免疫磁珠分選效率為6倍。流式細(xì)胞分析法所產(chǎn)生的偏差可能是受到了未解離磁珠及SSCs本身轉(zhuǎn)基因熒光的影響。河南protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠哪家好

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