COIP常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)策
1：如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?
磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來(lái)源及所屬亞型有關(guān)，請(qǐng)確 認(rèn)抗體的類(lèi)型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低，可以通過(guò)增加抗體與磁珠的孵育時(shí)間（ 30～120min）、提高結(jié)合緩沖液的pH值（8～9）及降低離子強(qiáng)度（ 25～100mM NaCl）等方法提高親和效率。
2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應(yīng)中的特異性?
可以先將抗體與樣品進(jìn)行孵育，形成抗體-抗原復(fù)合物，再用 Protein A/G磁珠捕獲復(fù)合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結(jié)合效 率，并降低磁珠與樣品接觸的時(shí)間，從而提高沉淀產(chǎn)物的特異性。對(duì) 于蛋白質(zhì)/核酸共沉淀或染色質(zhì)免疫共沉淀也推薦使用此法。 應(yīng)用免疫磁珠分離法純化弓形蟲(chóng)速殖子的研究。天津anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商
人腦**組織中分離,培養(yǎng),純化和鑒定腦**干細(xì)胞(BTSCs),探討CD133免疫磁珠分選方法獲取BTSCs的可行性及BTSCs的生物學(xué)特性.方法:留取人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤新鮮標(biāo)本,分離獲得腦腫瘤細(xì)胞.應(yīng)用CD133免疫磁珠分選方法純化BTSCs;流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選陽(yáng)性率;神經(jīng)球計(jì)數(shù)法分析CD133+/-亞群細(xì)胞神經(jīng)球形成情況;免疫熒光方法檢測(cè)CD133+/-亞群細(xì)胞表面神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)標(biāo)記物CD133,神經(jīng)巢蛋白(nestin)表達(dá)情況;檢測(cè)CD133+/-亞群細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化后細(xì)胞表面分化標(biāo)記物β-TubulinⅢ,GFAP表達(dá)情況.結(jié)果:CD133+亞群細(xì)胞具有干細(xì)胞特性,可形成明顯的神經(jīng)球,具有自我更新和明顯的增殖能力,并且NSCs標(biāo)記物CD133,nestin表達(dá)陽(yáng)性,經(jīng)誘導(dǎo)分化后分化標(biāo)記物β-TubulinⅢ,GFAP表達(dá)陽(yáng)性;CD133-亞群細(xì)胞無(wú)上述特性.結(jié)論:CD133免疫磁珠分選方法獲得的CD133+亞群細(xì)胞即為BTSCs,該方法可以得到高純度的BTSCs,可以用于BTSCs的實(shí)驗(yàn)研究.
免疫磁珠分離成人骨髓中STRO-1^+陽(yáng)性細(xì)胞,獲得同質(zhì)性骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.方法:實(shí)驗(yàn)于2004-06/2005-06在東南大學(xué)修復(fù)重建外科研究所實(shí)驗(yàn)室完成.采集正常自愿獻(xiàn)髓者骨髓,淋巴細(xì)胞分離液體離心純化分離后利用免疫磁珠分離出STRO-1^+細(xì)胞,研究其生長(zhǎng)曲線,體外擴(kuò)增能力,集落形成能力,細(xì)胞表型,細(xì)胞周期,成骨能力.結(jié)果:①利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取STRO-1^+細(xì)胞.經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),相差顯微鏡下STRO-1^+細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞梭形外觀.②生長(zhǎng)曲線可分為細(xì)胞生長(zhǎng)延滯期,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期及穩(wěn)定期,細(xì)胞倍增時(shí)間為57h.③STRO-1^+細(xì)胞可以在體外擴(kuò)增12周左右,形成的成纖維細(xì)胞集落數(shù),處于細(xì)胞分裂期的細(xì)胞數(shù),擴(kuò)增倍數(shù)均低于傳統(tǒng)分離方法得到的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞.④經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè),STRO-1^+細(xì)胞穩(wěn)定地表達(dá)CD29,CD44,CD105,不表達(dá)造血細(xì)胞系的表面標(biāo)記CD14,CD34,CD45,HLA-DR.⑤經(jīng)成骨培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)STRO-1^+的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞具有很強(qiáng)的成骨分化能力.結(jié)論:利用免疫磁珠能夠從成人骨髓中快速分離,純化骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,且具有高效,靈敏。BEENbio ProteinA/G Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷(xiāo)。
羥基淀粉沉淀去除臍血紅細(xì)胞和免疫磁珠(MACS)陽(yáng)性選擇,建立富集,分離臍血CD34+細(xì)胞的簡(jiǎn)易實(shí)用方法,通過(guò)造血祖細(xì)胞集落培養(yǎng)分析其在細(xì)胞因子作用下的增殖潛能,觀察羥基淀粉沉淀對(duì)造血細(xì)胞增殖功能的影響.方法:采用羥基淀粉沉淀和改進(jìn)的MACS富集,分離臍血CD34+細(xì)胞,以甲纖半固體造血細(xì)胞培養(yǎng)法觀察其粒-單系細(xì)胞(CFU-GM)和紅系爆式集落(BFU-E)的數(shù)量和特性.結(jié)果:臍血分離前,CD34+細(xì)胞純度為1.5%～3%,MACS分離后其純度可達(dá)85%,羥基淀粉沉淀和MACS分離可達(dá)91%;CD34+造血祖細(xì)胞培養(yǎng)有明顯的增殖,采用IL-3,IL-6,SCF,GM-CSF,EPO等細(xì)胞因子組合擴(kuò)增培養(yǎng)9～14d,CD34+細(xì)胞在液體培養(yǎng)中有明顯擴(kuò)增,MACS分離后CD34+細(xì)胞總數(shù)增加39倍,羥基淀粉沉淀和MACS分離可增加45倍.結(jié)論:應(yīng)用羥基淀粉沉淀和改進(jìn)的MACS系統(tǒng)可有效富集,分離臍血CD34+細(xì)胞,羥基淀粉沉淀對(duì)CD34+細(xì)胞的富集,分離無(wú)影響;臍血細(xì)胞分離后作造血祖細(xì)胞培養(yǎng),可產(chǎn)生豐富的CFU-GM和BFU-E,說(shuō)明羥基淀粉沉淀分離的CD34+細(xì)胞的增殖功能優(yōu)于MACS分離CD34+細(xì)胞的增殖功能.免疫磁珠法富集循環(huán)腫瘤細(xì)胞研究進(jìn)展。湖南anti-HA COIP免疫磁珠哪家好
外周血微轉(zhuǎn)移前列腺Cancer細(xì)胞的免疫磁珠法檢測(cè)。天津anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商
常用的磁珠法DNA提取試劑盒，國(guó)外的有Dynal、Qiagen等，國(guó)內(nèi)將磁珠應(yīng)用于核酸提取的研究起源于02年左右，經(jīng)過(guò)近些年的反復(fù)試驗(yàn)，形成了穩(wěn)定的核酸提取體系，并已被***用于一些疾?。ㄈ缫腋?、丙肝、結(jié)核菌）等的定量檢測(cè)（如惠爾納米的系列磁珠法核酸提取試劑盒）。國(guó)產(chǎn)磁珠法試劑盒與進(jìn)口產(chǎn)品相比，已不單單是只具有價(jià)格優(yōu)勢(shì)，其產(chǎn)品的穩(wěn)定性、高效性、提取出的核酸的質(zhì)量與產(chǎn)量都足以與進(jìn)口磁珠法試劑盒媲美。但是進(jìn)口試劑盒長(zhǎng)期以來(lái)形成的完善的銷(xiāo)售渠道對(duì)國(guó)產(chǎn)試劑盒的推廣是一大挑戰(zhàn)。天津anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠供應(yīng)商
上海普平生物科技有限公司致力于化工，是一家招商型的公司。公司業(yè)務(wù)涵蓋科研試劑、耗材、儀器，納米脂質(zhì)體，細(xì)胞、分子、蛋白實(shí)驗(yàn)，科研項(xiàng)目等，價(jià)格合理，品質(zhì)有保證。公司從事化工多年，有著創(chuàng)新的設(shè)計(jì)、強(qiáng)大的技術(shù)，還有一批**的專業(yè)化的隊(duì)伍，確保為客戶提供良好的產(chǎn)品及服務(wù)。普平生物秉承“客戶為尊、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實(shí)”的經(jīng)營(yíng)理念，全力打造公司的重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力。