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廣東protein A/G COIP免疫磁珠性能

來源: 發(fā)布時間:2022-01-30

抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,并進行初步應用。方法采用B淋巴細胞雜交瘤技術制備抗熒光素單克隆抗體;制備腹水,經(jīng)50%硫酸銨粗提后,再經(jīng)陰離子交換樹脂DE52進一步純化單克隆抗體;采用氧化共沉淀法制備納米磁性粒子;乳液聚合法制備羧基磁性微球;用碳二亞胺將抗熒光素單克隆抗體共價偶聯(lián)于磁性微球表面,制備抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠。用制備的免疫磁珠檢測乙肝表面抗原,并與市售ELISA試劑盒的檢測結(jié)果進行比較。結(jié)果共獲得5株雜交瘤細胞株,其中1F12細胞株分泌的抗體效價、相對親和力較高,特異性較好;純化的1F12株單抗的純度達95%,蛋白含量為2.4mg/ml,ELISA效價為106,相對親和力為0.2mg/L,與FITC標記的BSA可特異性結(jié)合;納米磁性粒子的平均粒徑為150nm,鐵含量為71.63%;羧基磁性微球的平均粒徑為210nm,羧基含量約為2.15mmol/g;每克羧基磁性微球可結(jié)合抗熒光素單克隆抗體約12mg,制備的免疫磁珠可有效結(jié)合熒光素標記的蛋白。應用抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠檢測乙型肝炎表面抗原的靈敏度高于ELISA試劑,檢測限達0.1ng/ml。結(jié)論成功制備了抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,其具有應用于免疫檢測分析的價值。用免疫磁珠法檢測抗白念珠*烯醇化酶抗體。廣東protein A/G COIP免疫磁珠性能

免疫磁珠(Immunomagneticbead,IMB)技術是20世紀80年代出現(xiàn)的技術方法。以免疫學為基礎,滲透到病理、生理、藥理、微生物、生化及分子遺傳學等各個領域,其在免疫檢測、細胞分離、生物大分子純化和分子生物學等方面有著越來越***的使用。免疫磁珠的結(jié)構(gòu):磁珠是由**金屬顆粒(Fe2O3,Fe3O4),**外層包裹的高分子材料(如聚苯乙烯、聚氯乙烯)和**外層的功能配基(如-NH2,-COOH、-OH、-CHO)組成。免疫磁珠在生物醫(yī)學領域的應用:1.細胞分選,2.蛋白質(zhì)/抗體分離與純化。3.核酸分離純化核酸結(jié)合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。4.免疫檢測免疫磁珠由于粒徑小,比表面積大,可捕獲較多的待測物,并直接在其表面進行酶顯色、熒光或同位素顯示,從而建立了一系列檢測速度快、特異性高、靈敏度高和重復性好的免疫檢測方法。湖南蛋白質(zhì)免疫共沉淀免疫磁珠市場報價利用BEENBIO免疫磁珠技術檢測大腸*細胞。

免疫共沉淀(COIP)實驗過程
(1)轉(zhuǎn)染后24-48 h 可收獲細胞,加入適量細胞裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°C, 最大轉(zhuǎn)速離心30 min后取上清;
(2)取少量裂解液以備Western blot分析,剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過夜;
(3)取10μl protein A 瓊脂糖珠,用適量裂解緩沖液洗3 次,每次3,000 rpm離心3 min;
(4)將預處理過的10μl protein A 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h,使抗體與protein A瓊脂糖珠耦聯(lián);
(5)免疫沉淀反應后,在4°C 以3,000 rpm 速度離心3 min,將瓊脂糖珠離心至管底;將上清小心吸去,瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3-4次;***加入15μl的2×SDS 上樣緩沖液,沸水煮5分鐘;
(6)SDS-PAGE, Western blotting或質(zhì)譜儀分析。
注意的問題:
(1)細胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,多采用非離子變性劑(NP40或Triton X-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的,通過經(jīng)驗確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),細胞裂解液中要加各種酶抑制劑,如商品化的cocktailer。
(2)使用明確的抗體,可以將幾種抗體共同使用。
(3)使用對照抗體:

人腦**組織中分離,培養(yǎng),純化和鑒定腦**干細胞(BTSCs),探討CD133免疫磁珠分選方法獲取BTSCs的可行性及BTSCs的生物學特性.方法:留取人腦膠質(zhì)母細胞瘤新鮮標本,分離獲得腦腫瘤細胞.應用CD133免疫磁珠分選方法純化BTSCs;流式細胞儀檢測分選陽性率;神經(jīng)球計數(shù)法分析CD133+/-亞群細胞神經(jīng)球形成情況;免疫熒光方法檢測CD133+/-亞群細胞表面神經(jīng)干細胞(NSCs)標記物CD133,神經(jīng)巢蛋白(nestin)表達情況;檢測CD133+/-亞群細胞經(jīng)誘導分化后細胞表面分化標記物β-TubulinⅢ,GFAP表達情況.結(jié)果:CD133+亞群細胞具有干細胞特性,可形成明顯的神經(jīng)球,具有自我更新和明顯的增殖能力,并且NSCs標記物CD133,nestin表達陽性,經(jīng)誘導分化后分化標記物β-TubulinⅢ,GFAP表達陽性;CD133-亞群細胞無上述特性.結(jié)論:CD133免疫磁珠分選方法獲得的CD133+亞群細胞即為BTSCs,該方法可以得到高純度的BTSCs,可以用于BTSCs的實驗研究.免疫磁珠富集與免疫層析一體化檢測甲型流感病毒的研究。

探討小鼠脾臟CD8+T細胞的免疫磁珠負性分選方法,并對分選后所得細胞進行純度、活力及功能檢測.方法以免疫磁珠負性分選法從小鼠脾臟細胞中分離CD8+T細胞,流式細胞術檢測所得細胞的純度,臺盼藍檢測細胞活力并用ConA刺激檢測增殖能力.結(jié)果經(jīng)過流式細胞儀測定免疫磁珠負性分選后的小鼠脾臟CD8+T細胞純度達到(91.6±3.6)%,臺盼蘭染色細胞活力為(94.9±3.2)%,ConA刺激72h后有(56.3±1.7)%的細胞增殖.結(jié)論免疫磁珠負性分選法能夠分選出高純度的CD8+T細胞,并且不影響分選靶細胞的細胞活力和功能.紅細胞膜免疫磁珠檢測成分血中抗A/抗B的研究。湖南anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠經(jīng)銷商價格4折起

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標簽: 免疫磁珠