抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,并進行初步應用。方法采用B淋巴細胞雜交瘤技術(shù)制備抗熒光素單克隆抗體;制備腹水,經(jīng)50%硫酸銨粗提后,再經(jīng)陰離子交換樹脂DE52進一步純化單克隆抗體;采用氧化共沉淀法制備納米磁性粒子;乳液聚合法制備羧基磁性微球;用碳二亞胺將抗熒光素單克隆抗體共價偶聯(lián)于磁性微球表面,制備抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠。用制備的免疫磁珠檢測乙肝表面抗原,并與市售ELISA試劑盒的檢測結(jié)果進行比較。結(jié)果共獲得5株雜交瘤細胞株,其中1F12細胞株分泌的抗體效價、相對親和力較高,特異性較好;純化的1F12株單抗的純度達95%,蛋白含量為2.4mg/ml,ELISA效價為106,相對親和力為0.2mg/L,與FITC標記的BSA可特異性結(jié)合;納米磁性粒子的平均粒徑為150nm,鐵含量為71.63%;羧基磁性微球的平均粒徑為210nm,羧基含量約為2.15mmol/g;每克羧基磁性微球可結(jié)合抗熒光素單克隆抗體約12mg,制備的免疫磁珠可有效結(jié)合熒光素標記的蛋白。應用抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠檢測乙型肝炎表面抗原的靈敏度高于ELISA試劑,檢測限達0.1ng/ml。結(jié)論成功制備了抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,其具有應用于免疫檢測分析的價值。免疫磁珠法分離膽囊CancerCD133陽性細胞及其生物學特性鑒定。湖南anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠市場報價
免疫共沉淀(COIP)優(yōu)點
(1)相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的,處于天然狀態(tài);
(2)蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進行的,可以避免人為的影響;
(3)可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復合物。
免疫共沉淀(COIP)缺點
(1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用;
(2)兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;
(3)必須在實驗前預測目的蛋白是什么,以選擇***檢測的抗體,所以,若預測不正確,實驗就得不到結(jié)果,方法本身具有冒險性。
(4)靈敏度沒有親和色譜高。 天津anti-Flag COIP免疫磁珠哪家好免疫磁珠法分離純化人腎CancerCD133~+細胞實驗研究。
免疫磁珠法分離細胞是基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合,在外加磁場中,通過抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在磁場中,無該種表面抗原的細胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒有磁性,不在磁場中停留,從而使細胞得以分離。免疫磁珠應用分為正選法和負選法:正選法-磁珠結(jié)合的細胞就是所要分離獲得的細胞負選法-磁珠結(jié)合不需要的細胞,游離于上清液的細胞為所需細胞,一般而言,負選法比正選法的磁珠用量大磁珠:大小在0.1-0.45mm包被了生產(chǎn)的高質(zhì)量單抗磁珠已為白細胞亞群的分選所優(yōu)化將包被了特異性單抗的BDIMag磁珠加入細胞懸液,磁珠特異性地與有相應抗原的細胞亞群結(jié)合,通過分離得到的連有磁珠的細胞可直接用于功能試驗和用流式細胞儀檢測。BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。
磁珠與抗體偶聯(lián)的比較好條件,制備抗單增李斯特菌免疫磁珠;將免疫磁珠與顯色培養(yǎng)法結(jié)合,初步建立起利用免疫磁珠分離技術(shù)對單增李斯特菌進行分離鑒定的檢測方法.從而為食品中單增李斯特菌的檢測提供一種快速,高效和靈敏的檢測新方法.方法:以單增李斯特菌體作為免疫抗原,免疫新西蘭兔,獲得兔抗單增李斯特菌多克隆抗體,鑒定多抗活性以及與單增李斯特菌體的結(jié)合能力;用激光粒度儀和透射電鏡分析不同活性基團修飾磁珠的粒徑大小和分散性,選擇性質(zhì)穩(wěn)定的磁珠用以制備免疫磁珠;設計正交試驗,摸索pH,溫度,時間對氨基修飾磁珠與多抗偶聯(lián)的影響,選擇比較好條件制備免疫磁珠并用于捕獲單增李斯特菌;設計不同的偶聯(lián)緩沖溶液,偶聯(lián)時間,偶聯(lián)溫度,通過比較羧基修飾磁珠與抗體偶聯(lián)后上清中剩余的抗體量來確定比較好偶聯(lián)條件,運用制備的免疫磁珠對樣品中的單增李斯特菌進行捕獲,并與顯色平板結(jié)合試驗,鑒定制備的免疫磁珠捕獲單增李斯特菌的能力.BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠 Cell Nature Science。甘肅anti-HA COIP免疫磁珠代理價格4折起
免疫磁珠負性富集結(jié)合免疫熒光抗體技術(shù)檢測卵巢Cancer患者外周血CTCs的方法建立和應用。湖南anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠市場報價
免疫磁珠分離羊水來源OCT-4陽性胎兒干細胞的可行性.方法 采用免疫磁珠細胞分選法去除羊水細胞中CD44和SSEA4陽性細胞,使OCT-4陽性胎兒干細胞間接得到分離,體外培養(yǎng)擴增后,觀察細胞生長特性,免疫熒光染色計算OCT-4陽性胎兒干細胞得率,Real-TimePCR比較分離前后OCT-4表達量的差異,免疫組化檢測NANOG,AKP,MAP-2,NGFR和Myosin等細胞因子的表達.結(jié)果 經(jīng)免疫磁珠分離的細胞接種12h內(nèi)貼壁生長,形態(tài)呈梭形,部分呈多角形,融合后形成輻射狀排列.免疫熒光染色OCT-4陽性細胞得率為(90.15±8.25)%,Real-TimePCR檢測結(jié)果顯示分離后細胞OCT-4的表達量較未分離細胞和MSC有***性差異(P<0.01).原代培養(yǎng)可獲得(1~2)×107個細胞,3代可獲得(2~4)×108個細胞,傳至10代以后細胞的增殖能力下降.免疫組化結(jié)果顯示OCT-4陽性胎兒干細胞表達NANOG,AKP,MAP-2和NGFR等細胞因子.結(jié)論 免疫磁珠細胞分選法可以從羊水中分離出OCT-4陽性的胎兒干細胞,分離后的細胞保持干細胞原有特性及生物學特征,可作為組織工程種子細胞.湖南anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠市場報價
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