免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在agarosebeads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內(nèi)結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內(nèi)與興趣蛋白天然結合的，符合體內(nèi)實際情況，得到的結果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內(nèi)結合；也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。河南COIP免疫磁珠哪家好
用多聚抗原肽(multipleantigenpeptides,MAP)包被磁珠制備單表位抗體的方法.方法:通過Fmoc法固相化學合成UreB的8分支單表位MAP,將其作為免疫原免疫小鼠,獲得多克隆抗血清.將MAP以共價偶聯(lián)的方式包被磁珠制備免疫磁珠(immunomagneticbeads,IB),通過IB從多克隆抗血清中純化單表位抗體,熒光偏振(fluorescencepolarization,FP)法鑒定抗體的特異性,SDS-PAGE鑒定抗體純度,紫外分光光度法測定其回收率.結果:合成的MAP具有較強的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗體滴度高達1∶12800.MAP制備免疫磁珠的比較好包被濃度為100mg/L,包被效率比較高可達79%.應用MAP免疫磁珠從抗血清中純化得到的單表位抗體,經(jīng)鑒定與其他抗原表位無反應性,其純度為95%,抗體的回收率為5.8%.結論:MAP包被的磁珠可快速分離純化出針對某一抗原表位的特異性抗體,其性質類似單克隆抗體.這一方案在快速制備少量高特異性抗體中具有廣闊的應用前景.湖南protein A/G 免疫共沉淀免疫磁珠銷售BEENbio Anti HA Co-IP&CHIP磁珠 蛋白相互作用。
檢測EPCAM、MUC16兩種抗原在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細胞中表達的相關性。方法分別用羧基磁珠制備EPCAM、MUC16兩種免疫磁珠,分3組:EPCAM免疫磁珠檢測組、MUC16免疫磁珠檢測組、2種磁珠均等混合檢測組。對來源于同一患者的等體積外周血樣本進行循環(huán)腫瘤細胞檢測,HE染色后鑒定檢測值。結果EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+MUC16免疫磁珠對同體積、同來源樣本檢測值分別為22±11、14±6、28±12個腫瘤細胞(P0.05),說明檢測效率有統(tǒng)計學差異。結論MUC16與EPCAM在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細胞中**表達且存在差異,因此增加MUC16這一***標志物可有效提高上皮性卵巢*CTCs檢出數(shù)量。
COIP常見問題及對策
1：如何提高抗體與磁珠結合效率?
磁珠與抗體的結合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關，請確 認抗體的類型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間（ 30～120min）、提高結合緩沖液的pH值（8～9）及降低離子強度（ 25～100mM NaCl）等方法提高親和效率。
2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應中的特異性?
可以先將抗體與樣品進行孵育，形成抗體-抗原復合物，再用 Protein A/G磁珠捕獲復合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結合效 率，并降低磁珠與樣品接觸的時間，從而提高沉淀產(chǎn)物的特異性。對 于蛋白質/核酸共沉淀或染色質免疫共沉淀也推薦使用此法。 BEENbio Anti Flag Co-IP&CHIP磁珠全國招商代理。
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免疫磁珠法分離,并培養(yǎng)人腦膠質瘤干細胞的方法.方法將術中取得的腦膠質瘤標本,通過剪切,消化和吹打成單細胞懸液,篩網(wǎng)過濾,免疫磁珠分選試劑盒分選出CD133^+細胞,用神經(jīng)干細胞無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)出具有單細胞克隆能力的細胞球,取第3代進行誘導分化,分化前后用免疫細胞熒光化學方法鑒定**干細胞及分化后細胞.結果免疫磁珠分選出的CD133^+細胞,可懸浮生長并形成神經(jīng)干細胞樣細胞球,有較強的增殖能力,干細胞標志物巢蛋白(nestin)陽性,分化后細胞表達神經(jīng)元小管相關蛋白β-3(β-tubulin3)和星形膠質細胞膠質纖維酸性蛋白質(GFAP)特異性抗原,而巢蛋白,CD133^+陰性,并具有**的核型.結論免疫磁珠分選法可避免原代培養(yǎng)中眾多細胞混雜生長的發(fā)生,能夠從大量腫瘤細胞中分離出只占極少比例的**干細胞,細胞結合磁珠后在體外可以長期培養(yǎng)和傳代,進一步證實了**干細胞的存在,并為膠質瘤干細胞的研究奠定基礎.河南COIP免疫磁珠哪家好
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