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甘肅anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

來源: 發(fā)布時間:2022-01-27

Anti Flag COIP磁珠

產(chǎn)品價格


產(chǎn)品貨號
規(guī)格
價格
Beenbio -PR002-0.4
0.4 mL
1150 RMB
Beenbio -PR002-1
mL
1780 RMB
Beenbio -PR002-5
5 mL
6825 RMB


產(chǎn)品描述

BEENbio Anti Flag COIP磁珠在大小為1um的納米磁珠上供價結(jié)合了大量的小鼠Anti Flag單克隆抗體,與傳統(tǒng)的Anti Flag COIP瓊脂糖凝膠比較,抗體結(jié)合能力相同,背景更低,由于采用磁性分離,使得每次COIP可以節(jié)省40%的時間。


產(chǎn)品特性


項目
特性
抗體亞型
鼠源IgG1
抗體純化方法
Protein A 純化制備
適用范圍
免疫共沉淀(IP),Flag tag蛋白純化
推薦使用體積
COIP: 500μl 細胞裂解液 使用 10μL磁珠
融合蛋白結(jié)合容量
大于1.1 mg Flag tagged protein/mL 磁珠



儲存條件

4oC長期穩(wěn)定,


使用說明

磁珠的準備

重懸Anti Flag 免疫磁珠,取10 μL加入到500 μL TBS,洗滌3次,分離磁珠,棄上清。

樣品的結(jié)合(binding)

在上述沉淀中加入500 μL細胞裂解液,室溫緩慢孵育2小時或者4°C條件下過夜,分離磁珠,棄上清。

結(jié)合過程中,磁珠可能會出現(xiàn)聚團或呈片狀,屬于正?,F(xiàn)象,不會影響實驗結(jié)果。

洗滌(washing):0.5 mL TBS緩沖液洗滌四次,每次5min,分離磁珠,棄上清。

洗脫(elution):上述所得沉淀中加 50 μL 1×蛋白上樣緩沖液,煮沸5 min,冷卻后分離磁珠,吸取上清液,進行SDS-PAGE檢測。 免疫磁珠法分離膽囊CancerCD133陽性細胞及其生物學特性鑒定。甘肅anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

免疫磁珠分離羊水來源OCT-4陽性胎兒干細胞的可行性.方法 采用免疫磁珠細胞分選法去除羊水細胞中CD44和SSEA4陽性細胞,使OCT-4陽性胎兒干細胞間接得到分離,體外培養(yǎng)擴增后,觀察細胞生長特性,免疫熒光染色計算OCT-4陽性胎兒干細胞得率,Real-TimePCR比較分離前后OCT-4表達量的差異,免疫組化檢測NANOG,AKP,MAP-2,NGFR和Myosin等細胞因子的表達.結(jié)果 經(jīng)免疫磁珠分離的細胞接種12h內(nèi)貼壁生長,形態(tài)呈梭形,部分呈多角形,融合后形成輻射狀排列.免疫熒光染色OCT-4陽性細胞得率為(90.15±8.25)%,Real-TimePCR檢測結(jié)果顯示分離后細胞OCT-4的表達量較未分離細胞和MSC有***性差異(P<0.01).原代培養(yǎng)可獲得(1~2)×107個細胞,3代可獲得(2~4)×108個細胞,傳至10代以后細胞的增殖能力下降.免疫組化結(jié)果顯示OCT-4陽性胎兒干細胞表達NANOG,AKP,MAP-2和NGFR等細胞因子.結(jié)論 免疫磁珠細胞分選法可以從羊水中分離出OCT-4陽性的胎兒干細胞,分離后的細胞保持干細胞原有特性及生物學特征,可作為組織工程種子細胞.廣東anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠市場報價免疫磁珠法富集循環(huán)腫瘤細胞研究進展。

實驗優(yōu)化建立基于免疫磁分離技術(shù)對金黃色葡萄球菌的快速分離方法,為后續(xù)快速檢測提供基礎(chǔ).利用金黃色葡萄球菌多抗制備的免疫磁珠對其捕獲.結(jié)合平板菌落計數(shù),考察包被磁珠時多抗加入量,免疫磁珠加入量及捕獲時間等因素對捕獲效率的影響.在單因素實驗基礎(chǔ)上進行正交實驗,并對該方法的靈敏度,特異性及其在食品中的應用效果初步探索.結(jié)果表明,比較好捕獲條件為抗體加入量30μL,免疫磁珠加入量80μL,捕獲時間45min,在此條件下捕獲效率均超過30%,該方法捕獲限可達到101CFU/mL,特異性良好,并初步用于羊肉卷洗水中金黃色葡萄球菌的快速分離,捕獲時間小于1h.免疫磁分離作為一種快速的分離篩選方法,可用于食源性金黃色葡萄球菌的快速分離.

碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺(EDC/NHS)方法在羧基磁珠表面偶聯(lián)抗體,制備可高效分離細胞的免疫磁珠.方法用EDC和NHS活化磁珠表面羧基,活化的羧基再與抗體上氨基進行反應,從而將抗體偶聯(lián)于磁珠表面,獲得免疫磁珠.使用高性能納米粒度分析儀(HPPS),二辛可酸(BCA)蛋白定量試劑盒,流式細胞儀,透射電鏡(TEM)表征磁珠的粒徑,磁珠表面聯(lián)接的抗體量及其免疫活性.結(jié)果HPPS檢測磁珠平均水力學粒徑為110nm;磁珠表面偶聯(lián)52.4μg抗CD11a+抗體/mg磁珠.經(jīng)磁分離后細胞的流式分析結(jié)果表明,CD11a+免疫磁珠可以有效分離髓系白血病細胞系(KG-1a)細胞,免疫磁珠均勻結(jié)合于細胞表面,且不影響細胞的活性.結(jié)論成功制備可用于細胞分離且不影響分離后細胞活性的新型免疫磁珠.免疫磁珠法分離和純化胚胎神經(jīng)干細胞。

COIP實驗步驟
第三步:免疫共沉淀
根據(jù)不同的抗體結(jié)合方式,這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同,但是本質(zhì)是一樣的,都是為了形成抗原-蛋白復合物。
如果直接使用 Protein A/G 結(jié)合的 beads,先進行細胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育,再加入 beads 將蛋白-抗體復合物拉下來。
如果使用了交聯(lián)劑將抗體與 Protein A/G 固定,或者直接將抗體固定在 beads,則將固定抗體的 beads 與細胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。
增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ,可以降低非特異性結(jié)合,以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。
第四步:洗脫與檢測
***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復合物洗脫,并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測鑒定蛋白。當?shù)鞍谆蚩贵w對低 pH 的緩沖液敏感,可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。
注意事項:
如后續(xù)需進行酶活或功能性分析,則需使用兼容下游檢測的 Elution buffer 進行洗脫。
對于交聯(lián)劑結(jié)合的 beads,為了保持抗體偶聯(lián)樹脂的活性,應立即再生和存儲樹脂,保證抗體可以重復利用。
免疫磁珠陰性法富集惡性胸腔積液中腫瘤細胞方法的建立。河南anti-Myc 免疫共沉淀免疫磁珠供應商

人骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨間充質(zhì)祖細胞的免疫磁珠分選和鑒定。甘肅anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

分離轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓造血干細胞.運用針對小鼠干細胞表面特異表達的干細胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細胞,用流式細胞術(shù)(FACS)檢測MACS分離后骨髓細胞中干細胞(Sca-1陽性細胞)比例,監(jiān)測細胞分選效果.結(jié)果顯示MACS分離后骨髓細胞中Sca-1陽性細胞所占比例達85%以上,涂片觀察發(fā)現(xiàn)細胞組成和細胞形態(tài)學特征與FACS所得結(jié)果一致.MACS可以從轉(zhuǎn)基因小鼠全骨髓細胞中分離出Sca-1陽性的骨髓造血干細胞,細胞純度可達85%以上.甘肅anti-Flag 免疫共沉淀免疫磁珠批量定制

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標簽: 免疫磁珠